Ključna razlika med FPLC in HPLC je, da je FPLC vrsta tekočinske kromatografije, ki čisti velike biomolekule, kot so proteini, nukleotidi in peptidi, medtem ko je HPLC vrsta tekočinske kromatografije, ki ločuje spojine z majhno molekulsko maso.
Tekočinska kromatografija je tehnika, ki se uporablja za ločevanje vzorca na posamezne komponente. Do te ločitve pride zaradi interakcije specifičnih vzorcev z mobilno in stacionarno fazo. Komponente znotraj vzorca so ločene glede na afiniteto vsake komponente za mobilno fazo v tekočinski kromatografiji. Ko gredo mobilna faza in vzorec skozi kolono, se komponente vzorca začnejo ločevati v pasove, ki jih je mogoče zaznati s spektroskopijo UV-VIS. Zato sta FPLC in HPLC dve vrsti tehnik tekočinske kromatografije.
Kaj je FPLC?
FPLC je vrsta tekočinske kromatografije, ki čisti velike biomolekule, kot so proteini, nukleotidi in peptidi. Hitro proteinsko tekočinsko kromatografijo (FPLC) je leta 1982 na Švedskem prvič razvilo in tržilo podjetje Pharmacia. Pogosto se uporablja za analizo ali čiščenje beljakovinskih mešanic. To poteka na podlagi principa afinitete komponent vzorca do gibljive tekočine (mobilna faza) in poroznega trdnega materiala (mirna faza). V FPLC je mobilna faza pufer, stacionarna faza pa je smola, sestavljena iz kroglic. Običajno je sestavljen iz premrežene agaroze, pakirane v valjasto stekleno ali plastično kolono.
Slika 01: Aparat FLPC (hitra proteinska tekočinska kromatografija)
V večini strategije FLPC se uporablja ionska izmenjevalna smola. Zato se bo beljakovina, ki nas zanima, vezala na smolo z interakcijo naboja. Tehnika FLPC prav tako uporablja dva pufra: pufer 1 (tekoči pufer) in pufer 2 (elucijski pufer). Na začetku, ko pufer in zmes vzorca tečeta skozi kolono, se bo zanimiva beljakovina v mešanici vezala na smolo z interakcijo naboja. Toda beljakovina, ki nas zanima, postane disociirana in se vrne v raztopino v elucijskem pufru, ko elucijski pufer teče skozi kolono na koncu postopka. Kasneje gre raztopina (eluant, ki vsebuje beljakovino, ki nas zanima) skozi dva detektorja, ki merita koncentracijo soli in koncentracijo beljakovin. Ko je vsaka beljakovina eluirana, se med detekcijo prikaže kot "vrh" in se lahko zbere za nadaljnjo uporabo.
Kaj je HPLC?
HPLC je vrsta tekočinske kromatografije, ki ločuje spojine z majhno molekulsko maso. Leta 1969 je prvi HPLC komercialno proizvedel Waters Corporation, ZDA. Pri tekočinski kromatografiji visoke ločljivosti (HPLC) se mešanica vzorca (analit) v topilu (mobilna faza) črpa skozi kolono s kromatografskim polnilom (stacionarna faza) pri visokem tlaku. Mešanico vzorca prenaša premikajoči se tok nosilnega plina helija ali dušika.
Slika 02: HPLC (High-Performance Liquid Chromatography)
Komponente v vzorčni mešanici, ki imajo najmanjšo interakcijo s stacionarno fazo ali največjo interakcijo z mobilno fazo, bodo hitreje zapustile kolono. Po drugi strani pa bodo komponente v vzorčni mešanici, ki imajo največjo interakcijo s stacionarno fazo ali najmanjšo interakcijo z mobilno fazo, izstopile iz kolone počasneje. Na podlagi zgornjega načela interakcije je mogoče ločiti komponente vzorčne mešanice. Poleg tega instrument detektor prepozna vsako komponento vzorčne mešanice, ki izstopi iz kolone. HPLC se uporablja za pregled okoljskih in bioloških vzorcev glede prisotnosti ali odsotnosti znanih spojin, kot so zdravila, toksini ali pesticidi. Uporablja se v različnih panogah, kot so farmacevtska, okoljska, forenzična in kemična.
Kakšne so podobnosti med FPLC in HPLC?
- FPLC in HPLC sta vrsti tekočinske kromatografije.
- Oboje se uporablja za ločevanje in identifikacijo bioloških vzorcev.
- Imajo tekočo mobilno fazo in trdno stacionarno fazo.
- Obe tehniki uporabljata stolpec za prehod skozi vzorec.
- Te tehnike uporabljajo črpalke, detektorje, ventile in programsko opremo za ločevanje in odkrivanje vzorcev.
Kakšna je razlika med FPLC in HPLC?
FPLC je vrsta tekočinske kromatografije, ki se uporablja za čiščenje velikih biomolekul, kot so proteini, nukleotidi in peptidi. HPLC je vrsta tekočinske kromatografije, ki se uporablja za ločevanje spojin z majhno molekulsko maso. Torej, to je ključna razlika med FPLC in HPLC. Poleg tega FPLC uporablja monitorje pH in prevodnosti kot zbiralnike frakcij. V nasprotju s tem HPLC ne uporablja merilnikov pH in prevodnosti ter zbiralnikov frakcij.
Spodnja infografika navaja več razlik med FPLC in HPLC v obliki tabele.
Povzetek – FPLC proti HPLC
Kromatografija je laboratorijska analitska tehnika, ki se uporablja za ločevanje komponent iz mešanice. Razdeljena je na več vrst, kot so kolonska kromatografija, plinska kromatografija, tekočinska kromatografija, ionsko izmenjevalna kromatografija itd. FPLC in HPLC sta dve vrsti tehnik tekočinske kromatografije. FPLC je vrsta tekočinske kromatografije, ki se uporablja za čiščenje velikih biomolekul, kot so proteini, nukleotidi in peptidi. Po drugi strani pa je HPLC vrsta tekočinske kromatografije, ki se uporablja za ločevanje spojin z majhno molekulsko maso. To je torej povzetek razlike med FPLC in HPLC.
