Ključna razlika med HPLC in hitro HPLC je, da je tlak črpalke, ki ga uporabljamo za HPLC, okoli 40 MPa, medtem ko je tlak črpalke za hitro HPLC okoli 3-5 MPa.
Najpogostejša tehnika, ki jo uporabljamo za ločevanje komponent zmesi, je “tekočinska kromatografija”. Obstaja več tehnik za doseganje tega namena, med katerimi je HPLC zelo priljubljena. HPLC je kratica za High Performance Liquid Chromatography, ki identificira, kvantificira in loči komponente tekoče mešanice na hiter in učinkovit način. Hitra HPLC je posebna aplikacija HPLC, ki je v zadnjem času pritegnila pozornost tistih, ki se ukvarjajo s preučevanjem raztopin.
Kaj je HPLC?
HPLC je tekočinska kromatografija visoke ločljivosti. Uporablja visok tlak za potiskanje topil, tako da gredo skozi kolono. Prav tako je idealen način za ločevanje in preučevanje različnih spojin, kot so aminokisline, nukleinske kisline, ogljikovi hidrati, steroidi, antibiotiki in ogljikovodiki. HPLC ima veliko prednosti pred drugimi metodami ločevanja zmesi, kot sta višja ločljivost in hitrejša analiza. Odpravlja potrebo po ponovnem pakiranju in regeneraciji ter nudi boljši nadzor nad parametri in tako povečuje učinkovitost ločevanja. V idealnem primeru je HPLC primeren za obsežne aplikacije, saj lahko loči zelo majhne delce in omogoča uporabo visokih tlakov, ki olajšajo pretok topil.
Slika 01: HPLC kolona
Na kratko, metoda delovanja tehnike HPLC je naslednja. Najprej bi morali vzorec s pomočjo črpalke vnesti v tok mobilne faze v diskretnih majhnih količinah. Tlak črpalke je treba vzdrževati pri 40 MPa. Ta tok mobilne faze pronica skozi kolono HPLC. Nato gredo skozi kolono tudi komponente vzorca. Njihove hitrosti gibanja pa se razlikujejo med seboj zaradi razlike v interakcijah med komponentami vzorca in adsorbentom znotraj kolone. Ta adsorbent imenujemo stacionarna faza, ker se nahaja znotraj kolone (se ne premika). Nato lahko na koncu kolone zberemo vzorec, ki se eluira iz kolone, s čimer lahko ločeno zberemo komponente v vzorcu.
Kaj je hitri HPLC?
Pred kratkim so raziskovalci raziskovalnega inštituta Schering Plow razvili hitro tehniko HPLC, ki je napredna različica HPLC, saj omogoča še hitrejše ločevanje spojin iz mešanice. Ta tehnika, znana tudi kot hitra HPLC, uporablja delce silicijevega dioksida z zlitim jedrom velikosti 2,7 um, ki so narejeni s taljenjem poroznega silicijevega dioksida velikosti 0,5 um na delce trdnega silicijevega dioksida. Zaradi teh edinstveno izdelanih delcev je postopek ločevanja zelo hiter in to tudi pri nizkem protitlaku, kot ga uporabljamo pri HPLC.
Slika 02: Aparat FPLC
Hitra HPLC daje rezultate, primerljive z UPLC, vendar znanstveniki menijo, da je ta tehnika boljša, saj ne zahteva zelo drage ultravisokotlačne opreme. Odlično je, da hitra HPLC ne zahteva novih laboratorijskih protokolov.
Kakšna je razlika med HPLC in hitro HPLC?
HPLC je tekočinska kromatografija visoke ločljivosti, hitra HPLC pa je napredna oblika tekočinske kromatografije visoke ločljivosti. Ključna razlika med HPLC in hitro HPLC je, da je tlak črpalke, ki ga uporabljamo za HPLC, približno 40 MPa. Medtem ko je tlak črpalke za hitro HPLC okoli 3-5 MPa. Poleg tega lahko s tehniko HPLC ločimo različne spojine, kot so aminokisline, nukleinske kisline, ogljikovi hidrati, steroidi, antibiotiki in ogljikovodiki, medtem ko se hitra tehnika HPLC uporablja predvsem za ločevanje beljakovin.
Spodnja infografika predstavlja več informacij o razliki med HPLC in hitrim HPLC.
Povzetek – HPLC proti hitri HPLC
HPLC je tehnika tekočinske kromatografije, ki je postala zelo priljubljena po vsem svetu. Fast HPLC je nova različica HPLC, raziskovalci na inštitutu Schering Plow so razvili to novo tehniko. Ključna razlika med HPLC in hitro HPLC je v tlaku črpalke, ki ga uporabljamo za ločevanje. To je; tlak črpalke, ki ga uporabljamo za HPLC, je okoli 40 MPa. Toda tlak črpalke za hitro HPLC je približno 3-5 MPa.
