Ključna razlika med HPLC in UPLC je v tem, da HPLC omogoča analizo delcev z velikostjo okoli 5 mikrometrov, medtem ko UPLC omogoča veliko manjše delce okoli 2 mikrometrov.
HPLC in UPLC sta tehniki tekočinske kromatografije, ki sta uporabni pri ločevanju komponent spojine. Da bi spoznali razliko med HPLC in UPLC, moramo najprej vedeti, kaj je HPLC. To je zato, ker je UPLC posebna različica HPLC in jo zlahka razumemo, če vemo, kaj je HPLC.
Kaj je HPLC?
Izraz HPLC pomeni visokozmogljiva tekočinska kromatografija. To je tehnika, s katero lahko ločimo različne sestavine spojine. Poleg tega je to najpogosteje uporabljena tehnika za identifikacijo, kvantifikacijo in ločevanje komponent zmesi. Poleg tega ta tehnika uporablja visok tlak za potiskanje topil skozi kolono. Poleg tega so glavne aplikacije HPLC v biokemiji za analizo sestavin spojine. Je idealen način za ločevanje in identifikacijo aminokislin, nukleinskih kislin, beljakovin, ogljikovodikov, pesticidov, ogljikovih hidratov, antibiotikov, steroidov in neštetih drugih anorganskih snovi.
Slika 01: Sistem HPLC v laboratoriju
Na kratko, metoda delovanja tehnike HPLC je naslednja. Najprej moramo vzorec s pomočjo črpalke vnesti v tok mobilne faze v diskretnih majhnih količinah. Tlak črpalke je treba vzdrževati pri 40 MPa. Nato ta tok mobilne faze pronica skozi kolono HPLC. Prav tako gredo komponente v vzorcu skozi kolono. Vendar se njihove hitrosti gibanja med seboj razlikujejo. Ta razlika nastane zaradi razlike v interakcijah med komponentami vzorca in adsorbentom znotraj kolone. Ta adsorbent imenujemo stacionarna faza, ker se nahaja znotraj kolone (se ne premika). Drugič, na koncu kolone lahko zberemo vzorec, ki eluira iz kolone. Tam lahko določimo razlike v retencijskih časih za vsako komponento v vzorcu.
Kaj je UPLC?
Izraz UPLC je kratica za Ultra High-Performance Liquid Chromatography. Je različica HPLC, vendar je metoda delovanja enaka. Vendar za razliko od HPLC ta metoda omogoča analizo zelo majhnih delcev, kot so 2 mikrometra veliki delci.
Slika 02: Naprava UPLC
Poleg tega zagotavlja hitrejšo analizo. Pri tej tehniki uporabljamo tlak črpalke 100 MPa za vnos vzorca v kolono. Zato ta visok tlak potrjuje, da je v kolono vnesen celoten vzorec. Tako je to zelo učinkovito v primerjavi s HPLC.
Kakšna je razlika med HPLC in UPLC?
Izraz HPLC pomeni tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti, medtem ko izraz UPLC pomeni tekočinsko kromatografijo ultra visoke ločljivosti. Zato je tehnika UPLC razvita različica HPLC. Tako je način delovanja pri obeh tehnikah enak. Vendar je UPLC bolj učinkovit v primerjavi s HPLC, ker uporablja visok tlak črpalke; tlak črpalke za HPLC je 40 MPA, medtem ko je za UPLC 100 MPa. Zato je to razlika med HPLC in UPLC. Predvsem pa je ključna razlika med HPLC in UPLC v tem, da HPLC omogoča analizo delcev, katerih velikost je okoli 5 mikrometrov, medtem ko UPLC omogoča veliko manjše delce okoli 2 mikrometrov.
Povzetek – HPLC proti UPLC
UPLC je oblika HPLC. Tako so metode delovanja enake. Vendar pa lahko v UPLC najdemo nekaj izboljšanih funkcij v primerjavi s HPLC. Zato obstaja nekaj razlik med HPLC in UPLC. Vendar je ključna razlika med HPLC in UPLC v tem, da HPLC omogoča analizo delcev, katerih velikost je okoli 5 mikrometrov, medtem ko UPLC omogoča veliko manjše delce okoli 2 mikrometrov.
