Ključna razlika med RP HPLC in HIC je, da RP HPLC uporablja bolj polarno mobilno fazo in manj polarno stacionarno fazo. Medtem ko HIC uporablja hidrofobno stacionarno fazo, ki omogoča, da se hidrofobne molekule pritrdijo nanjo.
Kromatografija je analitična tehnika, ki pomaga ločiti mešanico na komponente. Najprej moramo raztopiti vzorec, ki ga bomo ločili v raztopino. To mešanico raztopine in snovi imenujemo mobilna faza. Nato se mobilna faza spusti skozi drug material, imenovan stacionarna faza. Stacionarna faza določa ločevanje komponent. Do ločevanja pride zaradi delitve materiala med mobilno fazo in stacionarno fazo.
Kaj je RP HPLC?
Izraz RP HPLC je kratica za reverzno fazno visoko zmogljivo tekočinsko kromatografijo. Vključuje ločevanje komponent v mešanici glede na hidrofobnost. Hidrofobne komponente v mobilni fazi se povežejo z imobiliziranimi hidrofobnimi ligandi na stacionarni fazi, medtem ko se hidrofilne komponente eluirajo skozi stacionarno fazo, ne da bi se pritrdile na površino stacionarne faze.
Slika 01: Aparatura HPLC
Poleg tega ima ta metoda večjo ponovljivost v primerjavi z drugimi kromatografskimi tehnikami in kaže tudi široko uporabnost. Zato to metodo v laboratorijih uporabljamo za več kot 75 % vseh HPLC metod. Večino časa kot mobilno fazo uporabljamo vodno mešanico vode s polarnim organskim topilom, ki se meša. Tako bo zagotovil pritrditev hidrofobnih komponent v raztopini na površino stacionarne faze.
Kaj je HIC?
Izraz HIC pomeni hidrofobno interakcijsko kromatografijo. Je vrsta HPLC z reverzno fazo in ta metoda se uporablja predvsem za ločevanje velikih biomolekul, kot so beljakovine. Pri tej metodi moramo za izdelavo vzorca biomolekule uporabiti vodni medij. To je zato, ker lahko organska topila povzročijo denaturacijo beljakovin. Poleg tega ta tehnika uporablja interakcijo med velikimi molekulami z rahlo hidrofobno površino stacionarne faze. Poleg tega moramo v vzorcu uporabiti visoko koncentracijo soli, ker spodbuja zadrževanje beljakovin na embalaži; ta proces se imenuje soljenje. S postopnim zmanjševanjem koncentracije soli lahko dosežemo, da se biomolekule eluirajo ločeno glede na njihovo hidrofobnost.
Običajno ta metoda uporablja pogoje, nasprotne tistim pri ionsko izmenjevalni kromatografiji. Pri tej tehniki moramo najprej spustiti pufersko raztopino skozi kolono, da zmanjšamo solvatacijo topljenca v vzorcu. Izpostavi hidrofobne regije proteina. Ko pa je molekula bolj hidrofobna, je za spodbujanje vezave potrebno manj soli. Pri tem se najprej eluirajo manj hidrofobne raztopine, v skladu s spremembo koncentracije soli pa se bolj hidrofobne raztopine eluirajo nazadnje.
Kakšna je razlika med RP HPLC in HIC?
Kromatografija je analitska tehnika za ločevanje komponent v mešanici. RP HPLC in HIC sta dve specializirani kromatografski tehniki. Ključna razlika med RP HPLC in HIC je v tem, da RP HPLC uporablja bolj polarno mobilno fazo in manj polarno stacionarno fazo, medtem ko HIC uporablja hidrofobno stacionarno fazo, ki omogoča, da se hidrofobne molekule pritrdijo nanjo.
Spodnja infografika povzema razliko med RP HPLC in HIC.
Povzetek – RP HPLC proti HIC
Kromatografija je analitska tehnika za ločevanje komponent v mešanici. RP HPLC in HIC sta dve specializirani kromatografski tehniki. Ključna razlika med RP HPLC in HIC je v tem, da RP HPLC uporablja bolj polarno mobilno fazo in manj polarno stacionarno fazo, medtem ko HIC uporablja hidrofobno stacionarno fazo, ki omogoča, da se hidrofobne molekule pritrdijo nanjo.
