Ključna razlika med HPLC z reverzno fazo in normalno fazo je, da HPLC z reverzno fazo uporablja nepolarno stacionarno fazo in polarno mobilno fazo, medtem ko HPLC z normalno fazo uporablja polarno stacionarno fazo in manj polarno mobilno fazo.
HPLC normalne faze je najstarejša tehnika HPLC, ki jo je Tswett uporabljal pri svojih ločevanju rastlinskih izvlečkov; uporabil je kredo v steklenem stolpcu. To je bil klasični način kromatografije, zaradi katerega so ga poimenovali "normalna" tehnika. Po drugi strani pa je HPLC z reverzno fazo nasprotje običajne tehnike, ki so jo znanstveniki razvili v zadnjem času.
Kaj je HPLC z reverzno fazo?
Reverznofazna HPLC je kromatografska tehnika, pri kateri uporabljamo hidrofobno stacionarno fazo. Med vsemi metodami HPLC uporabljamo to metodo približno 70 % zaradi široke uporabnosti in ponovljivosti. Stacionarna faza je nepolarna, mobilna faza pa je polarna.
Največkrat znanstveniki kot mobilno fazo uporabijo vodno mešanico vode s polarnim organskim topilom, ki se da mešati, kot sta acetonitril ali metanol. Zato analiti medsebojno delujejo z nepolarno stacionarno fazo.
Kaj je normalna faza HPLC?
HPLC normalne faze je kromatografska tehnika, pri kateri uporabljamo hidrofilno stacionarno fazo. Je tradicionalna metoda HPLC, čeprav je ne uporabljamo toliko. Stacionarna faza je polarna, mobilna faza pa nepolarna. Še pomembneje pa je, da je mobilna faza te tehnike 100 % organska. To pomeni, da se za to ne uporablja voda.
Slika 01: Profil vzorca za normalno fazne in reverzno fazne kromatograme HPLC glede na polarnost komponent v analitu.
Običajno stacionarna faza vsebuje silicijev dioksid, ciano, diol, faze z amino vezmi itd. Mobilne faze vključujejo organska topila, kot so heksan, etil acetat itd. Ta tehnika temelji na zadrževanju molekul topila ali analita na polarna stacionarna faza.
Kakšna je razlika med reverzno fazno in normalno fazno HPLC?
Reverznofazna HPLC je kromatografska tehnika, pri kateri uporabljamo hidrofobno stacionarno fazo. Stacionarna faza te tehnike je nepolarna, medtem ko je mobilna faza polarna. Poleg tega znanstveniki uporabljajo vodno mešanico vode s polarnim organskim topilom, ki ga je mogoče mešati, kot je acetonitril ali metanol, kot mobilno fazo v HPLC z reverzno fazo. V nasprotju s tem je normalnofazna HPLC kromatografska tehnika, pri kateri uporabljamo hidrofilno stacionarno fazo. Stacionarna faza te tehnike je polarna, medtem ko je mobilna faza nepolarna. Poleg tega znanstveniki uporabljajo organska topila, kot so heksan, etil acetat itd., kot mobilno fazo normalne faze HPLC. Spodnja infografika prikazuje razliko med HPLC z reverzno fazo in normalno fazo v obliki tabele.
Povzetek – HPLC z reverzno fazo v primerjavi z normalno fazo
Tehniki HPLC reverzne faze in normalne faze sta dve tehniki tekočinske kromatografije. Ključna razlika med HPLC z reverzno fazo in normalno fazo je v tem, da HPLC z reverzno fazo uporablja nepolarno stacionarno fazo in polarno mobilno fazo, medtem ko HPLC z normalno fazo uporablja polarno stacionarno fazo in manj polarno mobilno fazo.
