Ključna razlika med kolorimetričnim in fluorometričnim testom je, da kolorimetrični test določa koncentracijo obarvanih spojin v raztopini, medtem ko fluorometrični test določa kinetični mehanizem raztopine.
Biokemijski test je tehnika, ki analitično zazna ali kvantificira aktivnost biološke molekule ali snovi. Gre za postopek in vitro. Kolorimetrični test in fluorometrični test sta dve vrsti običajnih biokemičnih testov, ki se izvajata v laboratorijih. Številne tehnike, kot sta ELISA in western blotting, so tudi zapleteni biokemični testi za kvantifikacijo presnovne aktivnosti in merjenje funkcionalnega obnašanja biomolekul, kot so proteini, encimi in druge majhne molekule. Te vrste testov se uporabljajo za identifikacijo interakcij protein-DNA, protein-RNA in protein-protein.
Kaj je kolorimetrični test?
Kolorimetrični test je tehnika, ki določa koncentracijo obarvanih spojin v raztopini. Z drugimi besedami, kolorimetrični test je reakcija, ki vodi do spremembe barve zaradi encimske ali kemične reakcije med reagenti in analiti. Kolorimetrični testi se uporabljajo v biokemiji za testiranje encimov, specifičnih spojin, hormonov, protiteles in drugih analitov. Uporabljajo kolorimetre ali spektrofotometre. Kolorimetri so instrumenti, ki karakterizirajo obarvane vzorce, da bi zagotovili objektivno merjenje barvnih značilnosti. Spektrofotometer je naprava, ki meri jakost svetlobe kot funkcijo barve ali valovne dolžine svetlobe.
Slika 01: Kolorimetrični test
Kako deluje kolorimetrični test?
Pri kolorimetričnem testu pripravimo ploščo z določenim protitelesom, vezanim na vdolbinice. Nato se vzorec doda. To lahko omogoči, da se vzorec veže na protitelo. Nato se v jamice doda detekcijsko protitelo in substrat, da reagirata z detekcijsko sondo. Stop raztopina se doda na koncu pred odčitkom. Prazna vdolbinica, imenovana slepa, ostane brez vzorca. Pri kolorimetričnem testu temnejša kot je barva, večja je koncentracija analita. Običajno je za odčitavanje potrebna le ena valovna dolžina. Če pa obstaja referenčna meritev, se uporabita dve ali več valovnih dolžin.
Kaj je fluorometrični test?
Fluorometrični test je tehnika, ki določa kinetični mehanizem encimskih reakcij. Fluorometrični test poteka s tvorbo fluorescenčnega produkta iz nefluorescenčnega substrata ali obratno. Ta test uporablja tudi fluorescenčni resonančni prenos energije (FRET), kjer encimska reakcija spremeni položaj dveh fluoroforjev v substratu in tako spremeni intenzivnost fluorescence.
Slika 02: Fluorometrični test
Fluorometrični testi so na splošno veliko bolj občutljivi kot drugi testi. Ocene diagnostičnih encimov v tkivih, celicah ali vzorcih tekočin bolnikov se povečajo zaradi večje občutljivosti.
Kako deluje fluorometrični test?
Pri fluorometričnem testu se vzorcu v plošči doda substrat, fluorescenčni odziv pa se vzame s čitalnikom plošč. Tukaj se meri vsaka celica posebej. Neprozorne plošče se uporabljajo pri fluorometričnih testih. To zmanjša sipanje svetlobe. Za to vrsto testa sta potrebni dve valovni dolžini. Ena valovna dolžina je za zaznavanje vzbujanja, druga valovna dolžina pa za emisijo.
Kakšne so podobnosti med kolorimetričnim in fluorometričnim testom?
- Kolorimetrični test in fluorometrični test sta dve vrsti biokemičnih testov.
- Obe preiskavi se izvajata za medicinsko diagnostiko.
- Ti testi vključujejo encimsko reakcijo.
- Obe analizi vključujeta substrat in analite.
Kakšna je razlika med kolorimetričnim in fluorometričnim testom?
Kolorimetrični test je tehnika, ki določa koncentracijo obarvanih spojin v raztopini, medtem ko je fluorometrični test tehnika, ki določa kinetični mehanizem encimskih reakcij. Torej, to je ključna razlika med kolorimetričnim in fluorometričnim testom. Poleg tega so fluorometrični testi bolj občutljivi kot kolorimetrični testi; tako lahko fluorometrični testi zaznajo več analitov. Tako je to še ena pomembna razlika med kolorimetričnim in fluorometričnim testom. Poleg tega fluorometrični testi zahtevajo dve valovni dolžini, medtem ko se kolorimetrični testi izvajajo z eno valovno dolžino.
Spodnja infografika prikazuje več razlik med kolorimetričnim in fluorometričnim testom.
Povzetek – kolorimetrični v primerjavi s fluorometričnim preizkusom
Biokemični test je analitični postopek, ki se uporablja za določanje in kvantificiranje celičnih presnovnih reakcij. Kolorimetrični test in fluorometrični test sta dve vrsti biokemičnih testov. Kolorimetrični test je reakcija, ki vodi do spremembe barve zaradi encimske ali kemične reakcije med reagenti in analiti, medtem ko je fluorometrični test tehnika, ki se uporablja za določanje kinetičnega mehanizma encimskih reakcij. Oba testa sta odvisna od encimske reakcije, ki vključuje substrat in analit. Fluorometrični testi so bolj občutljivi kot kolorimetrični testi. Najpomembneje je, da fluorometrični testi zahtevajo dve valovni dolžini, medtem ko je kolorimetrične teste mogoče izvesti samo z eno valovno dolžino. To torej povzema razliko med kolorimetričnim in fluorometričnim testom.
