Ključna razlika – nitroceluloza proti najlonski membrani
Blotiranje je pomembna tehnika za odkrivanje specifičnih zaporedij DNA, RNA in proteinov iz njihovih mešanic v molekularni biologiji. Izvaja se z uporabo membrane, imenovane blot. Obstajajo različne tehnike blotiranja, kot so severno, južno in zahodno blotiranje. Izbira ustrezne membrane za postopek blotiranja mora biti skrbno opravljena, da se prepreči nespecifična vezava in napačna zaznavanja. Nitroceluloza, najlon in PVDF so običajno uporabljene membrane v tehnikah blotiranja. Imajo različne značilnosti. Ključna razlika med nitrocelulozno in najlonsko membrano je, da imajo nitrocelulozne membrane visok potencial imobilizacije beljakovin, medtem ko imajo najlonske membrane visok potencial imobilizacije nukleinske kisline. Vendar se obe vrsti membran pogosto uporabljata v tehnikah blotiranja.
Kaj je nitrocelulozna membrana?
Nitrocelulozna membrana je pogosto uporabljen membranski filter v tehnikah blotiranja nukleinske kisline in beljakovin. Ima visok potencial vezave na beljakovine. Zato se nitrocelulozne membrane pogosto uporabljajo v Western blotting tehniki. Nitrocelulozne membrane so združljive z vsemi hibridizacijskimi tehnikami in kažejo vrhunsko sposobnost vezave brez motenj. Nitrocelulozne membrane so po naravi hidrofilne. Vzpostavijo hidrofilno interakcijo z molekulami in jih učinkovito imobilizirajo na membrano. Komercialne nitrocelulozne membrane so na voljo v dveh velikostih por: 0,45 in 0,2 µm.
Slika 01: Nitrocelulozna membrana, uporabljena pri Western blottingu
Kaj je najlonska membrana?
Najlonska membrana je druga vrsta komercialne membrane, ki se uporablja v tehnikah blotiranja. Alternativno se uporablja z nitroceluloznimi membranami za južno in severno pikanje. Najlonske membrane so zaradi svoje visoke afinitete za vezavo z DNA idealne za Southern blotting kot nitroceluloza. Zaradi številnih edinstvenih značilnosti najlonskih membran raziskovalci običajno uporabljajo najlonske membrane za južno in severno pikanje namesto preko nitrocelulozne membrane. Za razliko od nitroceluloze so najlonske membrane priporočljive tudi za odstranjevanje in ponovno sondiranje.
Slika 02: Najlonska membrana, uporabljena za Southern blotting
Kakšna je razlika med nitrocelulozno in najlonsko membrano?
Nitroceluloza proti najlonski membrani |
|
| Nitrocelulozne membrane so krhke. | Najlonske membrane so manj krhke. |
| Upravljanje | |
| Težko jih je obvladati. | Z njimi je enostavno rokovati. |
| Ponavljanje | |
| Nepodprte nitrocelulozne membrane je težko ponovno sondirati. | Ponovno sondiranje je enostavno z najlonskimi membranami. |
| Združljivost z različnimi pogoji shranjevanja | |
| Nitrocelulozne membrane imajo manjšo trdnost, da prenesejo različne pogoje shranjevanja. | Najlonske membrane se robustneje odzivajo na različne pogoje shranjevanja. |
| Uporabi | |
| Potrebno je predhodno vlaženje. | Predhodno vlaženje ni potrebno za najlonske membrane. |
| Hidrofilna narava | |
| Nitrocelulozne membrane so po naravi hidrofilne, vendar manj hidrofilne kot najlonske membrane. | Po naravi so zelo hidrofilne. |
| Potencial imobilizacije | |
| Nitrocelulozne membrane imajo manjšo afiniteto za nukleinske kisline. Ima pa visoko afiniteto za beljakovine. | Najlonske membrane imajo velik vezni potencial z nukleinskimi kislinami kot nitrocelulozne membrane. |
Povzetek – Nitroceluloza proti najlonski membrani
Nitrocelulozne in najlonske membrane so posebni listi, ki se uporabljajo v tehniki blotiranja za reprodukcijo vzorca pasov na gelu. Omogočajo možnost detekcije določenega zaporedja ali proteina iz zmesi z imobilizacijo na membrani. Ko se molekule imobilizirajo na membrani, jo lahko uporabimo kot substrat za hibridizacijsko analizo z označenimi sondami. Nitrocelulozna membrana se pogosto uporablja za detekcijo beljakovin v western blotting tehniki zaradi svoje visoke vezavne afinitete z beljakovinami. Najlonske membrane se pogosto uporabljajo za južno in severno pikanje. To je razlika med nitrocelulozno in najlonsko membrano.
