Ključna razlika – HPLC proti HPTLC
Ključna razlika med HPLC in HPTLC je v tem, da HPLC omogoča kvantitativno ločevanje komponent v vzorcu, medtem ko HPTLC ne omogoča kvantitativnega ločevanja komponent v vzorcu.
Kromatografija je metoda fizikalnega ločevanja, ki se uporablja za ločevanje in identifikacijo komponent v mešanici. Tako HPLC kot HPTLC sta kromatografski tehniki. HPLC je tekočinska kromatografija visoke ločljivosti. HPTLC je tankoplastna kromatografija visoke ločljivosti.
Kaj je HPLC?
HPLC je tekočinska kromatografija visoke ločljivosti. To je analitična tehnika, ki se uporablja za ločevanje, identifikacijo in količinsko opredelitev komponent v mešanici. Pri tej tehniki se vzorec raztopi v ustreznem topilu. Nato se topilo z vzorcem spusti skozi črpalko z danim tlakom. Črpalka je napolnjena s trdnim vpojnim materialom. Potem se nekatere komponente močno vežejo na vpojni material, medtem ko se druge komponente vežejo ohlapno. Zaradi tega imajo komponente različne pretoke skozi črpalko. Zato je mogoče komponente enostavno ločiti.
Slika 01: Sistem HPLC
Asorbentni material, ki polni črpalko, je znan kot stacionarna faza. Topilo z raztopljenim vzorcem je znano kot mobilna faza. Črpalka, ki se uporablja pri tej tehniki, se imenuje kolona. Kolona je napolnjena z adsorbentom, najpogosteje z delci silicijevega dioksida. Velikost teh delcev je lahko od 2 do 50 μm. Na proces ločevanja vplivata sestava mobilne faze in temperatura sistema. Interakcije med stacionarno fazo in komponento v vzorcu so lahko hidrofobne interakcije, dipol-dipol interakcije, ionska vez itd.
Delovni tlak HPLC je precej višji kot pri tradicionalni tekočinski kromatografiji. Leži okoli 50-350 barov. Razlika med tekočinsko kromatografijo in HPLC je v tem, da pri tekočinski kromatografiji vzorec pade skozi kolono pod vplivom težnosti, medtem ko je pri HPLC vzorec pod pritiskom skozi kolono. Tudi velikost kolone in absorbcijskih delcev je zelo majhna v primerjavi s tradicionalno tekočinsko kromatografijo. Vendar je ločljivost, ki jo daje tehnika HPLC, boljša.
Kaj je HPTLC?
HPTLC je tankoplastna kromatografija visoke ločljivosti. Je napredna in avtomatizirana oblika tradicionalnega TLC. Ta tehnika zagotavlja učinkovito rešitev v kratkem času. Pri tej metodi analize lahko vzorec in referenco analiziramo hkrati, kar omogoča primerjavo vzorca z referenco. Zagotavlja izboljšano analitično natančnost kot druge kromatografske tehnike. Čas za analizo je krajši. Tehnika je poceni tehnika.
Slika 02: Analiza živilskih barvil s HPTLC
Metoda HPTLC je preprost postopek, odpravljen pa je tudi korak priprave vzorca (pri tradicionalni TLC je korak priprave vzorca vključen pred ločevanjem. Ta korak vključuje čiščenje in obogatitev). Topilo je mogoče uporabiti neposredno brez predhodne obdelave, čeprav druge kromatografske tehnike zahtevajo predhodno obdelavo, kot so razplinjevanje, filtracija itd.
Adsorbentni material, uporabljen pri HPTLC, je silicijev dioksid z zelo majhnimi velikostmi delcev. Pri tradicionalni TLC je velikost delcev silicijevega dioksida 5–20 μm, medtem ko je pri HPTLC 4–8 μm. Vzorec se z aplikatorjem nanese na ploščo HPTLC. Omogoča enoten in varen nanos. Nato se plošče postavijo v komoro z mobilno fazo. Komora mora biti nasičena s hlapi mobilne faze. Po postopku HPTLC je mogoče zaznati madeže, ki so se premaknili. Pri zaznavanju madežev na plošči tehnika HPTLC uporablja ustrezno UV območje ali jodno komoro.
Kakšna je razlika med HPLC in HPTLC?
HPLC proti HPTLC |
|
| HPLC je tekočinska kromatografija visoke ločljivosti. | HPTLC je tankoplastna kromatografija visoke ločljivosti. |
| Tehnika | |
| Pri HPLC gre mobilna faza s topilom skozi kolono, napolnjeno s stacionarno fazo. | Pri HPTLC se vzorec nanese na ploščo TLC in postavi v komoro, ki vsebuje mobilno fazo; potem lahko vzorec migrira navzgor po plošči skupaj z mobilno fazo. |
| Meritev | |
| Pri HPLC se za ločevanje komponent v vzorcu uporabijo razlike med pretoki komponent skozi kolono. | V HPTLC se razlike med razdaljami, ki jih prepotuje vsaka komponenta v vzorcu, uporabijo za ločevanje komponent v vzorcu. |
| Kvantitativno ločevanje | |
| HPLC omogoča kvantitativno ločevanje komponent v vzorcu. | HPTLC ne dovoljuje kvantitativnega ločevanja komponent v vzorcu. |
Povzetek – HPLC proti HPTLC
HPLC in HPTLC sta dve kromatografski tehniki. Ključna razlika med HPLC in HPTLC je v tem, da HPLC omogoča kvantitativno ločevanje komponent v vzorcu, medtem ko HPTLC ne dovoljuje kvantitativnega ločevanja komponent v vzorcu.
