Ključna razlika – HPLC proti LCMS
Najprej si poglejmo pomen HPLC in LCMS, preden analiziramo razliko med HPLC in LCMS. Kromatografija je tehnika ločevanja v kemijski analizi, pri kateri se sestavine vzorca ločijo med prehodom skozi kromatografski medij. Vključuje tudi interakcijo z vzorcem, stacionarno fazo in mobilno fazo. HPLC je kratica za High Performance Liquid Chromatography in se uporablja kot metoda tekočinske kromatografije v analizni kemiji. Kombinacija tekočinske kromatografije in masne spektroskopije (LCMS) je bila razvita za kvantitativno analizo izbranih biomolekul in je zelo občutljiv, natančen in specifičen preskusni postopek v primerjavi s HPLC. To je ključna razlika med HPLC in LCMC. Ta članek vam bo predstavil HPLC in LCMC, ki se ukvarjata s kemijsko analizo, in razpravljal o razlikah med HPLC in LCMS.
Kaj je HPLC?
Tekočinska kromatografija visoke ločljivosti (HPLC) je priljubljena tehnika ločevanja v analizni kemiji. Uporablja se predvsem za ločevanje komponent, identifikacijo in kvantificiranje vsake komponente v mešanici. Prej je bila ta metoda znana kot visokotlačna tekočinska kromatografija, ker je bila odvisna od črpalk za pretok tekočega topila pod tlakom, ki vsebuje mešanico vzorca, skozi kolono, napolnjeno s trdnim vpojnim materialom. Vsaka sestavina v vzorčni mešanici drugače sodeluje s trdnim vpojnim materialom, kar povzroči različne pretoke za različne sestavine. To lahko privede do ločevanja sestavin, ko iztekajo iz kolone HPLC.
HPLC se uporablja za različne aplikacije, kot so analiza ravni vitamina D v krvi, uživanje nezakonitih drog pri športnikih z odkrivanjem ostankov zdravil v njihovem urinu, razvrščanje sestavin kompleksnega biološkega vzorca za raziskovalne namene in analizo in proizvodnja farmacevtskih izdelkov.
Kaj je LCMS?
Tekočinska kromatografija – masna spektrometrija (LCMS) je analitična tehnika, ki združuje fizikalne ločitvene sposobnosti tekočinske kromatografije in masne analize masne spektrometrije (MS). Tekočinska kromatografija je tehnika ločevanja, masna spektrometrija pa se uporablja za analizo razmerja med maso in nabojem nabitih delcev. Fizično ločevanje običajno dosežemo s HPLC in alternativno z LCMS, znano tudi kot HPLC-MS. LCMS je prevladujoča analitična tehnika, ki ima v primerjavi s HPLC zelo visoko natančnost, občutljivost in specifičnost. Tako je uporaben v številnih aplikacijah, kot so raziskovalne namene, analiza zdravil, analiza hrane itd. LCMS se v glavnem uporablja za ločevanje, odkrivanje, prepoznavanje in kvantifikacijo biokemičnih lastnosti določenega vzorca v prisotnosti kompleksnih kemičnih mešanic.
Kakšna je razlika med HPLC in LCMC?
Akronim in definicija HPLC in LCMC
HPLC: HPLC je kratica za visoko zmogljivo tekočinsko kromatografijo. To je tehnika ločevanja, ki se uporablja predvsem za ločevanje komponent, identifikacijo in kvantificiranje vsake komponente v mešanici.
LCMS: LCMS je kratica za tekočinsko kromatografijo in masno spektrometrijo. To je analitska tehnika, ki združuje zmožnosti fizičnega ločevanja tekočinske kromatografije z zmožnostmi masne analize masne spektrometrije (MS).
Lastnosti HPLC in LCMC
Razvrstitev
HPLC: To je samo metoda tekočinske kromatografije.
LCMS: To je kombinacija metode tekočinske kromatografije in metode masne spektrometrije.
Učinkovitost
HPLC: V primerjavi z LCMS je analiza HPLC manj učinkovita in počasnejša.
LCMS: V primerjavi s HPLC je analiza LCMS učinkovita in hitrejša.
Občutljivost
HPLC: V primerjavi z LCMS je analiza HPLC manj občutljiva.
LCMS: V primerjavi s HPLC je analiza LCMS bolj občutljiva.
Specifičnost
HPLC: V primerjavi z LCMS je analiza HPLC manj specifična.
LCMS: V primerjavi s HPLC je analiza LCMS bolj specifična.
Natančnost
HPLC: HPLC daje manj natančne rezultate kot LCMS za določanje nekaterih kemikalij.
LCMS: LCMS daje natančnejše rezultate kot HPLC za določanje nekaterih kemikalij.
Komponenta
HPLC: HPLC se lahko obravnava kot komponenta LCMS.
LCMS: LCMS ni mogoče šteti za komponento HPLC.
Vir ionov
HPLC: Vir ionov ne obstaja v instrumentu HPLC.
LCMS: Vir ionov je prisoten v instrumentu LCMS.
Aplikacije
HPLC: Ione, polimere, organske molekule in biomolekule je mogoče analizirati s HPLC.
LCMS: Analizirati je mogoče organske molekule in biomolekule. V nasprotju s HPLC lahko LCMS uporabimo za pregledovanje nepopolno ločenih zmesi.
Operacija
HPLC: Diagram instrumenta HPLC je podan na sliki 1 in običajno vključuje samodejni vzorčevalnik, črpalke in detektor. Vzorčevalnik vnese zmes vzorca v mobilno fazo (zmes topil pod tlakom, kot so voda, acetonitril in/ali metanol), ki jo prenese v kolono. Črpalke dovajajo želeni pretok in sestavo mobilne faze skozi kolono. Kolona je napolnjena z adsorbentom, ki je zrnat trdni delec, kot je silicijev dioksid ali polimeri. Detektor proizvede signal, ki je sorazmeren s količino prisotnosti sestavin vzorca v koloni, kar omogoča merljivo analizo izbranih sestavin vzorca. HPLC instrument je krmiljen, analizo podatkov pa omogočata digitalni mikroprocesor in uporabniška programska oprema.
Slika 1: Diagram HPLC instrumenta
LCMS: Diagram instrumenta LCMS je podan na sliki 2. Ekstrakt vzorca se vstavi v kolono, sestavljeno iz HPLC. Ta stolpec ohranja vzorčne metabolite na podlagi fizikalnih lastnosti, različni metaboliti pa tečejo v masni spektrometer v različnih časovnih intervalih. Masna spektroskopija se uporablja za ocenjevanje mase delcev, za določanje elementarne razporeditve molekule in za razjasnitev strukture molekule. Vendar je treba vzorec ionizirati, da se ustvarijo nabite molekule, da se določi njihova razmerja med maso in nabojem. Zato namesto instrumentov HPLC LCMS sestavljajo dodatni trije moduli, kot so vir železa, masni analizator in detektor. Ionski vir lahko pretvori vzorec plinske faze v ione, masni analizator pa grupira ione glede na njihove mase z uporabo elektromagnetnih polj. Končno detektor kvantificira vrednosti in posreduje podatke za vsak ion, prisoten v vzorcu. Tehnika LCMS se lahko uporablja za kvalitativne in kvantitativne aplikacije.
Slika 2: Diagram instrumenta LCMS
Za zaključek je HPLC metoda tekočinske kromatografije, medtem ko je LCMS kombinacija tekočinske kromatografije in masne spektrometrije. Obe analizni tehniki imata različne značilnosti, vendar ju je mogoče uporabiti za identifikacijo in količinsko opredelitev sestave hrane, farmacevtskih izdelkov in drugih bioaktivnih molekul.
