Ključna razlika – imunofluorescenca proti imunohistokemiji
Diagnostika bolezni, ki uporablja molekularno biološke metode, je postala nastajajoče področje klinične laboratorijske tehnologije. Vključuje vse teste in metode za prepoznavanje bolezni in razumevanje vzroka bolezni z analizo DNK, RNK ali izraženih beljakovin v organizmu. Hiter napredek molekularne diagnostike je omogočil osnovne raziskave nalezljivih in nenalezljivih bolezni. Ti se uporabljajo za določanje sprememb v zaporedju ali nivojih izražanja v ključnih genih ali beljakovinah, ki sodelujejo pri bolezni. Imunofluorescenca (IF) in imunohistokemija (IHC) sta dve tako široko uporabljeni tehniki v biologiji raka. IF je vrsta IHC, pri kateri se metoda fluorescenčne detekcije uporablja za analizo monoklonskih in poliklonskih protiteles, medtem ko IHC uporablja kemične metode za odkrivanje monoklonskih in poliklonskih protiteles. To je ključna razlika med IF in IHC.
Kaj je imunofluorescenca (IF)?
Imunofluorescenca je tehnika odkrivanja, pri kateri so protitelesa, uporabljena v analizi, označena s fluorescenčnimi barvili ali fluorescenčnimi proteini za namen odkrivanja. Označena sekundarna protitelesa lahko povzročijo neželene signale v ozadju; zato tehnika IF temelji na trenutnem označevanju samega primarnega protitelesa, da bi se izognili neželenim signalom med odkrivanjem. S to tehniko se prepreči nespecifična vezava med primarnim in sekundarnim protitelesom, ki je hitrejša, saj ni sekundarne inkubacijske stopnje. Izboljšana je tudi kakovost podatkov.
Slika 01: Dvojno imunofluorescenčno barvanje za BrdU, NeuN in GFAP
Fluorokromi ali fluorescentna barvila so spojine, ki lahko absorbirajo sevanje, po možnosti ultravijolično sevanje, ki je vzbujeno. Ko delci iz vzbujenega stanja dosežejo osnovno stanje, oddajajo sevanje, ki ga zajame in zazna detektor ter tvori spekter. Zelo pomembno je, da je fluorescenčna oznaka združljiva in stabilna za določeno reakcijo in mora biti pravilno konjugirana s protitelesom, da dobimo natančne rezultate. Eden najpogosteje uporabljenih fluorokromov je fluorescein izotiocianat (FITC), ki je zelene barve z absorpcijsko in emisijsko valovno dolžino 490 nm oziroma 520 nm. Rodamin, drugo sredstvo, ki se uporablja pri IF, je rdeče barve in ima izrazito absorpcijsko in emisijsko najvišjo valovno dolžino 553 nm in 627 nm.
Kaj je imunohistokemija (IHC)?
IHC je metoda molekularnega testiranja, ki se uporablja za identifikacijo in potrditev prisotnosti antigena v ciljni celici. Ciljna celica je lahko kužni delec, mikrobni patogen ali celica malignega tumorja. IHC uporablja monoklonska in poliklonska protitelesa za ugotavljanje prisotnosti antigenov na celični površini ciljnih celic. Tehnika temelji na vezavi antigen-protitelo. Detekcijski marker je konjugiran s temi protitelesi, da se zazna prisotnost ali odsotnost določenega antigena. Ti markerji so lahko kemični markerji, kot so encimi, fluorescentno označena protitelesa ali radioaktivno označena protitelesa.
Slika 02: Rezina mišjih možganov, obarvana z imunohistokemijo
Najbolj priljubljena uporaba IHC je v biologiji rakavih celic za ugotavljanje prisotnosti malignih tumorjev, vendar se uporablja tudi za odkrivanje nalezljivih bolezni.
Kakšne so podobnosti med imunofluorescenco in imunohistokemijo?
- Imunofluorescenca in imunohistokemija potekata v pogojih in vitro.
- Obe tehniki temeljita na antigen-protitelesu
- Obe sta zelo hitri tehniki.
- Rezultati tehnik so ponovljivi.
- Oba imata izboljšano kakovost podatkov.
- Te tehnike, ki se uporabljajo pri diagnostiki raka in nalezljivih bolezni.
Kakšna je razlika med imunofluorescenco in imunohistokemijo?
Imunofluorescenca proti imunohistokemiji |
|
| IF je tehnika odkrivanja, pri kateri so protitelesa, uporabljena v testu, označena s fluorescentnimi barvili ali fluorescenčnimi proteini za odkrivanje. | IHC je tehnika odkrivanja, pri kateri so protitelesa, uporabljena v testu, označena s kemikalijami ali radioaktivnimi elementi za odkrivanje. |
| Natančnost | |
| Natančnost je večja pri IF tehniki v primerjavi z IHC. | Natančnost je manjša pri IHC. |
| Specifičnost | |
| IF je natančnejši. | IHC je manj specifičen. |
Povzetek – Imunofluorescenca proti imunohistokemiji
Molekularni mehanizmi so prinesli številne spremembe na področju medicine, kar je povzročilo napredne metode molekularnega testiranja, ki so povzročile revolucijo na področju diagnostike. Ti izumi so pripeljali do hitre in natančne identifikacije in potrditve bolezni ter s tem omogočili uspešno dajanje in proizvodnjo zdravil. Te tehnike se uporabljajo tudi v farmakologiji za iskanje tarč zdravil in za potrditev farmakokinetičnih lastnosti zdravila med presnovo zdravila. IF in IHC sta dve diagnostični metodi, ki temeljita na konceptu vezave antigena in protiteles, čeprav se način odkrivanja pri obeh tehnikah razlikuje. IF za odkrivanje antigena uporablja princip fluorescence, IHC pa za odkrivanje antigena uporablja koncept kemične konjugacije. To je razlika med IF in IHC.
Prenesite PDF različico Immunofluorescence vs Immunohistochemistry
Lahko prenesete PDF različico tega članka in jo uporabite za namene brez povezave v skladu z opombo o citiranju. Tukaj prenesite različico PDF. Razlika med imunofluorescenco in imunohistokemijo.
