Ključna razlika – Hibridizacija in situ v primerjavi z imunohistokemijo
Diagnostika raka in nalezljivih bolezni je priljubljen trend, kjer se uporabljajo nove tehnike, ki temeljijo na proteomiki in genomiki, za identifikacijo tumorjev ali nalezljivih celic, njihove proliferacije in mest razvoja celic ter analiziranje genetske osnove večine nalezljivih in nenalezljive bolezni. Rezultat tega bo natančna obdelava in načrtovanje zdravil ter razvoj prilagojenih terapij za bolezni. Hibridizacija in situ (ISH) in imunohistokemija (IHC) sta dve tako široko uporabljeni tehniki v biologiji raka in ključna razlika med hibridizacijo in situ in imunokemijo je v molekulah, ki se uporabljajo v postopku analize. Pri ISH se v analizi uporabljajo sonde nukleinske kisline, pri IHC pa se za diagnostične določitve uporabljajo monoklonska in poliklonska protitelesa.
Kaj je hibridizacija in situ (ISH)?
In situ hibridizacija je tehnika hibridizacije nukleinske kisline, ki se izvaja neposredno na delu ali odseku tkiva, v celotnem tkivu ali v celicah. Tehnika je odvisna od teorije Watson Crick komplementarnega združevanja baz, kar ima za posledico hibride DNA-DNA ali hibride DNA-RNA, ki lahko zaznajo mutirane gene ali identificirajo zahtevani gen, ki nas zanima. Enoverižna zaporedja DNA, dvoverižna zaporedja DNA, enoverižna zaporedja RNA ali sintetična oligonukleotidna zaporedja se uporabljajo kot sonde med tehniko hibridizacije in te sonde so označene z radioaktivnim fosforjem na njegovem 5' koncu za identifikacijske postopke po avtoradiografiji ali označene s fluorescenčnimi barvili. Na voljo so različne vrste tehnik ISH glede na vrsto uporabljene sonde in vrsto uporabljene tehnike vizualizacije.
Slika 01: Fluorescentna in situ hibridizacija
Obstaja veliko aplikacij ISH, predvsem v molekularni diagnostiki nalezljivih bolezni, da bi ugotovili prisotnost patogenov in potrdili patogena z molekularno diagnostiko. Uporablja se tudi na področju razvojne biologije, kariotipizacije in filogenetske analize ter fizičnega kartiranja kromosomov.
Kaj je imunohistokemija (IHC)?
Pri tehniki IHC je glavna analizirana molekula antigen. Med IHC se uporabljajo monoklonska in poliklonska protitelesa za ugotavljanje prisotnosti antigenov ob okužbi ali statusu proliferacije malignih celic. Tehnika temelji na vezavi antigen-protitelo, za to tehniko pa se uporabljajo encimske oznake; ena takih aplikacij je ELISA (encimski imunski test). Označevalci so lahko tudi fluorescentno označena protitelesa ali radioaktivno označena protitelesa.
Slika 02: Imunohistokemija
IHC se pogosto uporablja za odkrivanje rakavih celic. Diagnostični postopki ciljajo na antigene, ki so prisotni na tumorskih celicah, da prepoznajo in karakterizirajo tumor. Enak postopek je vključen za diagnosticiranje povzročiteljev okužb. Monoklonska in poliklonska protitelesa se uporabljajo tudi za analizo različnih genskih produktov, tako da omogočijo reakcijo vezave protitelesa na antigen med želenim proteinom in apliciranim sintetičnim protitelesom.
Kakšne so podobnosti med hibridizacijo in situ in imunohistokemijo?
- ISH in IHC sta zelo specifični reakciji.
- Obe tehniki sta zelo natančni.
- Obe tehniki se lahko uporabljata pri diagnostiki raka in nalezljivih bolezni.
- Te tehnike se izvajajo v sterilnih in vitro okoljih.
- Obe sta hitri tehniki, ki zagotavljata ponovljive rezultate.
- ISH in IHC uporabljata metode odkrivanja, kot so radijsko označevanje in tehnike fluorescence.
Kakšna je razlika med hibridizacijo in situ in imunohistokemijo?
In situ hibridizacija proti imunohistokemiji |
|
| ISH je tehnika hibridizacije nukleinske kisline, ki se izvaja neposredno na delu ali odseku tkiva ali celotnem tkivu. | IHC je tehnika, pri kateri se monoklonska in poliklonska protitelesa uporabljajo za ugotavljanje prisotnosti antigenov, ki so posebni proteinski označevalci, nameščeni na celičnih površinah. |
| Vrsta analiziranih bioloških molekul | |
| ISH analizira nukleinske kisline. | IHC analizira proteine-antigene. |
| Osnova biokemijske reakcije | |
| Pri tej tehniki pride do komplementarnega združevanja baz med DNA-DNA ali DNA-RNA. | Interakcije antigen-protitelo so vključene v imunohistokemijo. |
| Metode odkrivanja, povezane z encimi | |
| Metod za odkrivanje, povezanih z encimi, ni mogoče uporabiti v ISH. | Metode odkrivanja, povezane z encimi, se lahko uporabljajo v IHC. |
Povzetek – Hibridizacija in situ proti imunohistokemiji
Molekularna diagnostika so hitre in potrditvene metode, ki jih je mogoče uporabiti za identifikacijo nenalezljive bolezni, kot je rak, ali nalezljive bolezni, kot je HIV ali tuberkuloza, na podlagi molekularnih markerjev, prisotnih na celicah, ki vodijo do manifestacije bolezni.. Molekularni markerji so lahko prisotni v obliki izraženih proteinov ali na genetski ravni, na podlagi katere se uvedejo različne nove tehnike za povečanje učinkovitosti in so manj naporne, čeprav so te tehnike povezane z visokimi stroški. Tako je ISH odvisen od tvorbe hibrida DNA-DNA ali DNA-RNA, IHC pa je odvisen od specifičnih reakcij med protitelesom in antigenom. To je razlika med hibridizacijo in situ.
Prenesite PDF različico hibridizacije in situ proti imunohistokemiji
Lahko prenesete PDF različico tega članka in jo uporabite za namene brez povezave v skladu z opombo o citiranju. Prenesite PDF različico tukaj. Razlika med hibridizacijo in situ in imunohistokemijo.
