Ključna razlika med neposredno in indirektno imunofluorescenco je v tem, da direktna imunofluorescenca uporablja eno samo protitelo, ki deluje proti tarči, ki nas zanima, medtem ko indirektna imunofluorescenca uporablja dve protitelesi za označevanje tarče, ki nas zanima.
Imunofluorescenca ali slikanje celic je tehnika, ki se uporablja za označevanje specifičnega ciljnega antigena s fluoroforjem. Tu je fluorofor fluorescentna kemična spojina, ki lahko ob vzbujanju svetlobe ponovno oddaja svetlobo. Ko se fluorofor veže na tarčni antigen, omogoči detekcijo tarčne molekule v vzorcu. Za nadaljnji opis, ko se antigen veže s specifičnim protitelesom, ga je mogoče konjugirati s fluoroforji. Zato je pri opazovanju pod fluorescenčnim mikroskopom enostavno zaznati prisotnost tarčnega antigena v vzorcu.
Poleg tega obstajata dve vrsti imunofluorescence; neposredna in posredna imunofluorescenca. Razlika med direktno in indirektno imunofluorescenco je predvsem v številu uporabljenih protiteles in konjugaciji fluoroforja. To pomeni, da se pri neposredni imunofluorescenci fluorofor neposredno konjugira s primarnim protitelesom, medtem ko se pri indirektni imunofluorescenci fluorofor konjugira s sekundarnim protitelesom.
Kaj je neposredna imunofluorescenca?
Imunofluorescenca uporablja protitelesa za odkrivanje specifičnih ciljnih antigenov. Neposredna imunofluorescenca je ena od dveh vrst imunofluorescence. Pri neposredni imunofluorescenci je vključeno eno samo protitelo (primarno protitelo), fluorofor pa se neposredno konjugira s primarnim protitelesom. Po vezavi protitelesa s tarčnim antigenom fluorofor oddaja fluorescenco, ki jo lahko zaznamo s fluorescenčnim mikroskopom.
Slika 01: Neposredna imunofluorescenca
Vendar je neposredna imunofluorescenca draga metoda, saj so primarno konjugirana protitelesa draga v primerjavi s sekundarnimi protitelesi. Kljub temu ne vključuje dodatnega koraka, torej krajšo tehniko. Poleg tega so nespecifične vezave zmanjšane pri neposredni imunofluorescenci. Zato je navzkrižna reaktivnost vrst majhna. Toda pri detekciji je občutljivost neposredne imunofluorescence šibka v primerjavi s posredno imunofluorescenco.
Kaj je posredna imunofluorescenca?
Posredna imunofluorescenca je druga vrsta imunofluorescence, ki vključuje dve vrsti protiteles, kot so primarna in sekundarna protitelesa pri označevanju tarčnega antigena. Pri tej metodi se fluorofor konjugira s sekundarnim protitelesom. Zato ta tehnika vključuje dodaten korak.
Slika 02: Imunofluorescenca
Vendar pa je občutljivost pri tej metodi visoka, saj je več fluoroforjev mogoče konjugirati s sekundarnimi protitelesi, kar olajša odkrivanje. Poleg tega je indirektna imunofluorescenca cenejša zaradi dejstva, da je konjugacija sekundarnih protiteles cenejša in lažja. V primerjavi z neposredno imunofluorescenco je navzkrižna reaktivnost vrst pri indirektni metodi visoka.
Kakšne so podobnosti med direktno in indirektno imunofluorescenco?
- Gre za dve vrsti imunofluorescenčne tehnike.
- Primarna protitelesa in fluorofor vključujejo obe metodi.
- Pri obeh metodah pride tudi do reakcije antigen-protitelo.
- Poleg tega tako neposredna kot posredna imunofluorescenca uporabljata fluorescenčni mikroskop za odkrivanje antigena.
Kakšna je razlika med direktno in indirektno imunofluorescenco?
Imunofluorescenca je lahko neposredna ali posredna glede na konjugacijo fluoroforja z uporabljenimi protitelesi. Pri neposredni imunofluorescenci se fluorofor konjugira s primarnim protitelesom, ki je edino protitelo, ki vključuje to tehniko. V nasprotju s tem se pri indirektni imunofluorescenci fluorofor konjugira s sekundarnim protitelesom, ki je ena od dveh vrst protiteles, ki sodelujeta v tehniki. Zato je glavna razlika med neposredno in posredno imunofluorescenco vrsta protitelesa, ki se konjugira s fluoroforjem.
Naslednja infografika ponuja vzporedno primerjavo razlike med neposredno in posredno imunofluorescenco.
Povzetek – Neposredna proti posredni imunofluorescenci
Imunofluorescenca je tehnika, ki se uporablja za odkrivanje prisotnosti specifičnih antigenov v vzorcu. Ta tehnika uporablja specifična protitelesa. Zato se pri tem protitelesa konjugirajo s fluoroforji, da jih zaznajo s fluorescentnim mikroskopom. Poleg tega obstajata dve vrsti imunofluorescence, in sicer neposredna in posredna imunofluorescenca. Neposredna imunofluorescenca vključuje eno protitelo in fluorofor, neposredno konjugiran s tem protitelesom. Posredna imunofluorescenca vključuje dve protitelesi; primarno in sekundarno ter fluorofor, konjugiran s sekundarnim protitelesom. Ker se več sekundarnih protiteles lahko veže s primarnim protitelesom in se lahko več fluoroforjev konjugira s sekundarnimi protitelesi, je indirektna imunofluorescenca bolj občutljiva metoda kot neposredna metoda. Poleg tega je posredna metoda cenejša od neposredne. To je torej razlika med neposredno in posredno imunofluorescenco.
