Ključna razlika med gelsko filtracijo in afinitetno kromatografijo je, da je gelska filtracijska kromatografija odvisna od razlik v molekulski masi ali velikosti vzorca analita, medtem ko je afinitetna kromatografija odvisna od afinitete analita do imobiliziranega liganda.
Izraz kromatografija v analizni kemiji se nanaša na postopek ločevanja komponent v mešanici z uporabo različnih tehnik. Kromatografija je skupno ime, ki predstavlja različno število različnih metod ločevanja.
Kaj je gelska filtracijska kromatografija?
Gel filtracijska kromatografija je analitska tehnika, pri kateri je ločevanje komponent odvisno od razlike v molekulski masi ali velikosti. Ta tehnika je znana tudi kot kromatografija z izključitvijo velikosti ali kromatografija z molekularnim sitom. Tehnika ločevanja v tem procesu je odvisna od različne sposobnosti molekul v vzorcu, da vstopijo v pore medija za gelsko filtracijo.
Pri tehniki gelske filtracije stacionarna faza vsebuje kroglice hidriranega, spužvastemu materialu, ki ima pore molekularnih dimenzij z ozkim razponom velikosti. Če spustimo vodno raztopino, sestavljeno iz molekul različnih velikosti, skozi kolono, ki vsebuje ta »molekularna sita«, se molekule, ki so večje od por filtrirnega medija, hitro premikajo skozi kolono. Nasprotno pa manjše molekule vstopijo v pore gela in se počasi premikajo skozi kolono. Molekule eluirajo iz kolone po padajoči velikosti molekul. Tukaj je meja izključitve gela molekulska masa najmanjših molekul, ki ne morejo prodreti skozi pore danega gela.
Obstajajo različne vrste tehnik gelske filtracije, kot so posredna metoda gelske filtracije, gelska filtracija v stanju dinamičnega ravnovesja, dializa z gelskimi kroglicami itd. Posredna gelska filtracijska kromatografija je uporabna pri določanju prostih ščitničnih hormonov. Kromatografija z gelsko filtracijo v stanju dinamičnega ravnovesja je posredna tehnika, uporabna predvsem za merjenje prostih steroidov, kot so kortizol, testosteron itd. Dializa z gelskimi kroglicami je po drugi strani modifikacija gelske filtracije v stanju dinamičnega ravnovesja, ki je sorazmerno preprostejša.
Kaj je afinitetna kromatografija?
Afinitetna kromatografija je analitična tehnika in metoda ločevanja, ki je odvisna od specifične vezavne interakcije med imobiliziranim ligandom in njegovim vezavnim partnerjem. Nekateri primeri vključujejo vezavo protitelo-antigen, vezavo encim-substrat in vezavo encim-inhibitor. Zato ima ta tehnika veliko pomembnih aplikacij pri čiščenju nukleinskih kislin, čiščenju beljakovin iz celičnih izvlečkov in čiščenju krvi.
Pri tej tehniki je najpomembnejša lastnost imobilizacija liganda. Za to lahko uporabimo različne materiale, kot so akrilati in silikagel. Pomembno je preprečiti sterično interferenco ciljne molekule z ligandom. Poleg tega je na trdno fazo vezan inhibitor. Temu inhibitorju pravimo distančnik. Klasično je distančnik sestavljen iz ogljikovodikove verige.
Stacionarna faza afinitetne kromatografije vsebuje jedro, distančnik in ligand. Včasih ima tudi kovinski ion, ki je povezan z ligandom. Najbolj prednostna trdna faza za stacionarno fazo v tej tehniki je agarozni gel, ker ga je enostavno razdeliti za polnjenje in pakiranje kolone s smolnimi plastmi poljubne velikosti in je dovolj velik, da biomolekule prosto tečejo v in skozi kroglice. Ligandi se lahko kovalentno pritrdijo na kroglični polimer na različne načine. Najpogostejše distančne spojine so cianogen bromid, epoksid, epoksid s C6 kislino in diamin. Po drugi strani pa se ligand, ki ga lahko uporabimo, razlikuje glede na tarčo, npr. protitelo-antigen, železovi ali aluminijevi ioni-fosfoproteini, avidin-biotin, glutation-GST, kelator-His-označeni proteini itd.
Kakšna je razlika med gelsko filtracijo in afinitetno kromatografijo?
Kromatografija je pomembna analitska tehnika. Kromatografija z gelsko filtracijo in afinitetna kromatografija sta dve pomembni različici kromatografije. Ključna razlika med gelsko filtracijo in afinitetno kromatografijo je, da je gelska filtracijska kromatografija odvisna od razlik v molekulski masi ali velikosti vzorca analita, medtem ko je afinitetna kromatografija odvisna od afinitete analita do imobiliziranega liganda.
Povzetek – gelska filtracija proti afinitetni kromatografiji
Obstajajo različne vrste kromatografskih tehnik glede na njihovo uporabo in naravo vzorca analita. Gelska filtracija in afinitetna kromatografija sta dve taki vrsti tehnik. Ključna razlika med gelsko filtracijo in afinitetno kromatografijo je, da je gelska filtracijska kromatografija odvisna od razlik v molekulski masi ali velikosti vzorca analita, medtem ko je afinitetna kromatografija odvisna od afinitete analita do imobiliziranega liganda.
