Ključna razlika – pretočna citometrija v primerjavi s FACS
V kontekstu celične teorije so celice osnovna strukturna in funkcionalna enota vseh živih organizmov. Razvrščanje celic je metodologija, ki se uporablja za ločevanje različnih celic glede na fiziološke in morfološke značilnosti. Lahko so intracelularnih ali zunajceličnih značilnosti. Medsebojno delovanje DNK, RNK in proteinov velja za znotrajcelične interaktivne lastnosti, medtem ko se oblika, velikost in različne površinske beljakovine obravnavajo kot zunajcelične lastnosti. V sodobni znanosti so metodologije razvrščanja celic pripeljale do pomoči pri različnih raziskavah v bioloških študijah in tudi pri vzpostavitvi novih načel z raziskavami v medicini. Razvrščanje celic poteka po različnih metodologijah, ki vključujejo tako primitivne z manj opreme kot napredne tehnološke metodologije z uporabo sofisticiranih strojev. Pretočna citometrija, fluorescenčno aktivirano razvrščanje celic (FACS), magnetna selekcija celic in razvrščanje posameznih celic so glavne uporabljene metodologije. Pretočna citometrija in FACS sta razvita za razlikovanje celic glede na njihove optične lastnosti. FACS je specializirana vrsta pretočne citometrije. Pretočna citometrija je metodologija, ki se uporablja pri analizi heterogene populacije celic glede na različne celične površinske molekule, velikost in prostornino, ki omogoča preiskavo posameznih celic. FACS je postopek, s katerim se vzorčna mešanica celic razvrsti glede na njihove značilnosti sipanja svetlobe in fluorescence v dve ali več posod. To je ključna razlika med pretočno citometrijo in FACS.
Kaj je pretočna citometrija?
Pretočna citometrija je metoda, ki se uporablja za pregled in določanje izražanja znotrajceličnih molekul in celične površine ter za opredelitev in karakterizacijo različnih vrst celic. Uporablja se tudi za določanje volumna in velikosti celic ter za oceno čistosti subpopulacij, ki so izolirane. To omogoča večparametrsko vrednotenje posameznih celic ob približno istem času. Pretočna citometrija se uporablja za merjenje intenzivnosti fluorescence, ki nastane zaradi fluorescentno označenih protiteles, ki pomagajo identificirati proteine ali ligande, ki se vežejo na povezane celice.
Slika 01: Pretočna citometrija
Na splošno pretočna citometrija vključuje predvsem tri podsisteme. To so fluidika, elektronika in optika. Pri pretočni citometriji je na voljo pet glavnih komponent, ki se uporabljajo pri razvrščanju celic. So pretočna celica (tok tekočine, ki se uporablja za njihov transport in poravnavo celic za proces optičnega zaznavanja), merilni sistem (lahko je različnih sistemov, vključno z živosrebrnimi in ksenonskimi žarnicami, visoko zmogljivimi vodno hlajenimi ali zračno hlajeni laserji z nizko močjo ali diodni laserji), ADC; Analogno-digitalni pretvorniški sistem, ojačevalni sistem in računalnik za analizo. Pridobivanje je postopek, s katerim se zberejo podatki iz vzorcev s pomočjo pretočnega citometra. Ta proces posreduje računalnik, ki je povezan s pretočnim citometrom. Programska oprema, ki je prisotna v računalniku, analizira informacije, ki jih v računalnik dovaja pretočni citometer. Programska oprema ima tudi možnost prilagajanja parametrov eksperimenta s krmiljenjem pretočnega citometra.
Kaj je FACS?
V okviru pretočne citometrije je fluorescenčno aktivirano razvrščanje celic (FACS) metoda, ki se uporablja za razlikovanje in razvrščanje vzorca mešanice bioloških celic. Celice so ločene od dveh ali več posod. Metoda razvrščanja temelji na fizičnih lastnostih celice, ki vključuje sipanje svetlobe in fluorescenčne značilnosti celice. To je pomembna znanstvena tehnika, ki jo je mogoče uporabiti za pridobitev zanesljivih kvantitativnih in kvalitativnih rezultatov fluorescenčnih signalov, ki jih oddaja vsaka celica. Med FACS na začetku predhodno pridobljena mešanica celic; suspenzija je usmerjena v središče ozkega curka tekočine, ki hitro teče. Tok tekočine je zasnovan tako, da loči celice v suspenziji glede na premer vsake celice. Mehanizem vibracij se uporabi za tok suspenzije, kar povzroči nastanek posameznih kapljic.
Slika 02: FACS
Sistem je kalibriran tako, da ustvari eno samo kapljico z eno celico. Tik pred nastankom kapljic se tekoča suspenzija premika vzdolž aparata za merjenje fluorescence, ki zaznava fluorescenčno značilnost vsake celice. Na mestu nastajanja kapljic je nameščen električni nabojni obroč, katerega naboj inducira na obroč pred merjenjem intenzitete fluorescence. Ko kapljice nastanejo iz toka suspenzije, se naboj ujame v kapljice, ki nato vstopijo v elektrostatični odklonski sistem. Glede na naboj sistem preusmeri kapljice v različne posode. Metoda uporabe polnjenja se razlikuje glede na različne sisteme, ki se uporabljajo v FACS. Oprema, ki se uporablja v FACS, je znana kot fluorescenčno aktivirani sorter celic.
Kakšna je podobnost med pretočno citometrijo in FACS?
Pretočna citometrija in FACS sta razvita za razlikovanje celic glede na njihove optične lastnosti
Kakšna je razlika med pretočno citometrijo in FACS?
Pretočna citometrija proti FACS |
|
| Pretočna citometrija je metodologija, ki se uporablja pri analizi heterogene populacije celic glede na različne celične površinske molekule, velikost in prostornino, kar omogoča preiskavo posameznih celic. | FACS je postopek, s katerim se vzorčna mešanica celic razvrsti glede na njihove značilnosti sipanja svetlobe in fluorescence v dva ali več vsebnikov. |
Povzetek – pretočna citometrija proti FACS
Celica je osnovna strukturna in funkcionalna enota vseh živih organizmov. Razvrščanje celic je postopek, s katerim so celice izolirane in diferencirane v različne kategorije na podlagi njihovih znotrajceličnih in zunajceličnih lastnosti. Pretočna citometrija in FACS sta dve pomembni metodologiji pri razvrščanju celic. Oba postopka sta razvita za razlikovanje celic glede na njihove optične lastnosti. Pretočna citometrija je metodologija, ki se uporablja pri analizi heterogene populacije celic glede na različne celične površinske molekule, velikost in prostornino, ki omogoča preiskavo posameznih celic. FACS je postopek, s katerim se vzorčna mešanica celic razvrsti glede na njihove značilnosti sipanja svetlobe in fluorescence v dve ali več posod. To je razlika med pretočno citometrijo in FACS.
Prenesite PDF različico pretočne citometrije proti FACS
Lahko prenesete PDF različico tega članka in jo uporabite za namene brez povezave v skladu z opombo o citiranju. Prenesite PDF različico tukaj Razlika med pretočno citometrijo in FACS
