Ključna razlika med Eliso in Elispotom je, da je Elisa encimski imunski test, ki določa skupno koncentracijo izločenih signalnih proteinov, medtem ko je Elispot encimski imunski test, ki zazna posamezne celice, ki izločajo citokine.
Elisa in Elispot sta dva encimsko vezana imunosorbentna testa, ki se pogosto uporabljata v medicini, rastlinski patologiji, biotehnologiji in različnih farmacevtskih industrijah. Pri teh tehnikah proteinski analit zazna protitelo, usmerjeno proti njemu. Elisa je najbolj priljubljen encimski imunski test, ki se uporablja v laboratorijih. Po drugi strani pa je Elispot encimski imunosorbentni test, ki se ne uporablja namesto Elise, temveč se v laboratorijih uporablja poleg Elise.
Kaj je test Elisa?
Elisa je encimski imunosorbentni test, ki določa skupno koncentracijo izločenih signalnih proteinov. To je široko uporabljen analitični biokemični test, ki sta ga prvič opisala Engvall in Perlmann leta 1971. Ta tehnika uporablja trdno fazni tip encimskega imunskega testa za odkrivanje prisotnosti specifičnega proteina v tekočem vzorcu z uporabo protiteles, usmerjenih proti temu specifičnemu proteinu. Ta test je pogosto uporabljeno diagnostično orodje v medicini, rastlinski patologiji in biotehnologiji.
Mehanizem testa ELISA
Pri večini testa ELISA je neznana količina antigena na začetku imobilizirana na trdno podlago (mikrolitrska plošča). Nato se ustrezno primarno protitelo nanese na trdno nosilno površino. To protitelo tvori kompleks z antigenom (kompleks antigen-protitelo). Primarno protitelo, vezano na antigen, je mogoče zaznati s sekundarnim protitelesom, ki je povezano z encimom prek biokonjugacije. V zadnjem koraku testa Elisa se doda snov, ki vsebuje substrat encima. Če pride do ustrezne vezave primarnega protitelesa na antigen, substrat povzroči zaznavno spremembo barve. Končno to kvantificira antigen v vzorcu.
Slika 01: Različne vrste Elisa
Poleg tega obstajajo različni pristopi k Elisi, kot sta neposredna Elisa in posredna Elisa. Trenutno se uporabljajo različni testi Elisa za odkrivanje človeških patogenov, kot so Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, virus hepatitisa B, virus hepatitisa C, E.coli, ki proizvaja enterotoksin, HIV in SARS-CoV-2.
Kaj je Elispot Assay?
Elispot je encimski imunosorbentni test, ki zazna posamezne celice, ki izločajo citokine. Cecil Czerkinsky je prvič opisal ELISpot leta 1983. To je vrsta testa, ki se osredotoča na kvantitativno merjenje pogostosti izločanja citokinov za posamezno celico. Razvrščena je tudi kot tehnika, ki uporablja protitelesa za odkrivanje biološkega ali kemičnega proteinskega analita. Fluorospot test je različica testa Elispot, ki uporablja fluorescenco za analizo več analitov (bolj tajnih proteinov).
Mehanizem testa Elispot
Pri tem mehanizmu se v vdolbinice mikrolitrskih plošč na začetku dodajo monoklonska protitelesa, specifična za citokine. Nato se želene opazovane celice dodajo v jamice. Kasneje se celice inkubirajo. Med celično inkubacijo lahko celice reagirajo na vse dražljaje in izločajo citokin. Citokini, ki so jih izločile inkubirane celice, se bodo pritrdili na protitelesa, saj so celice obdane z monoklonskimi protitelesi, specifičnimi za citokine.
Slika 02: Test Elispot
Za odkrivanje teh monoklonskih protiteles, specifičnih za citokine, se v jamico dodajo biotinilirana specifična detekcijska protitelesa. Biotinilirana specifična detekcijska protitelesa zajamejo monoklonska protitelesa, specifična za citokine, v jamice. Poleg tega so v jamice dodani konjugati streptavidina in encima, da se vežejo z detekcijskimi protitelesi. V zadnjem koraku se v jamice dodajo specifični substrati. Reakcije encimskih konjugatov in substratov povzročijo izrazite lise v vdolbinicah. Ta različna mesta se odčitajo na avtomatiziranem čitalniku ELISpot. Končno bo to dodatno izračunalo pogostost izločanja citokinov.
Kakšne so podobnosti med Eliso in Elispot?
- Oba sta encimsko vezana imunosorbentna testa.
- Obe testi zaznavajo specifične proteinske analite.
- Ti testi uporabljajo specifična protitelesa za identifikacijo proteinskih analitov.
- Oba testa uporabljata encime in substrate.
- Uporabljajo se kot diagnostično orodje v medicinskih laboratorijih.
Kakšna je razlika med Eliso in Elispot?
Elisa je encimski imunosorbentni test, ki določa skupno koncentracijo izločenih signalnih proteinov. Po drugi strani pa je Elispot encimski imunosorbentni test, ki meri posamezne celice, ki izločajo citokine. Torej, to je ključna razlika med Eliso in Elispotom. Poleg tega se pri testu Elisa antigen najprej imobilizira na mikrolitrske vdolbinice. Nasprotno pa je pri testu Elispot protitelo najprej imobilizirano na mikrolitrske vdolbinice. To je torej še ena razlika med Eliso in Elispotom.
Spodnja infografika predstavlja podrobno analizo razlike med Eliso in Elispotom v obliki tabele.
Povzetek – Elisa proti Elispot
Elisa in Elispot sta dva encimsko vezana imunosorbentna testa, ki se pogosto uporabljata v medicini, rastlinski patologiji, biotehnologiji in različnih farmacevtskih industrijah. Elisa zazna prisotnost liganda (beljakovine) v tekočem vzorcu z uporabo protiteles, usmerjenih proti ligandu, ki ga želite izmeriti. Test Elispot je široko uporabljena metoda za spremljanje imunskega odziva. Z uporabo protiteles zazna posamezne celice, ki izločajo citokine. Je tehnika imunskega in biološkega testa. To je torej povzetek razlike med Eliso in Elispotom.
