Ključna razlika med BCA in Bradfordovim testom je, da je BCA test dolgotrajen in manj natančen, medtem ko je Bradfordov test hiter in natančen.
BCA in Bradfordov test sta dve metodi za določanje koncentracije beljakovin. Ta dva testa imata različna načela testa in razlike v njuni natančnosti.
Kaj je BCA test?
BCA test ali test bicinhoninske kisline je biokemični test, uporaben pri določanju skupne koncentracije beljakovin v raztopini. Ta metoda se imenuje tudi Smithov test po njenem izumitelju Paulu K. Smithu. Ta analitska metoda kaže podobnosti z Lowryjevim proteinskim testom, Bradfordovim proteinskim testom ali biuretnim reagentom. Celotno koncentracijo beljakovin v danem vzorcu lahko opazujemo s spremembo barve raztopine vzorca, ki prehaja iz zelene v vijolično. Ta sprememba barve se pojavi sorazmerno z vsebnostjo beljakovin. Nato lahko uporabimo kolorimetrično tehniko za analizo intenzivnosti barve in vsebnosti beljakovin v vzorcu.
BCA metoda ocenjevanja beljakovin
Ko upoštevamo mehanizem testa BCA, tipična raztopina BCA vsebuje visoko alkalno raztopino s pH približno 11,25, sestavine te raztopine pa vključujejo bicinhoninsko kislino, natrijev karbonat, natrijev bikarbonat, natrijev tartrat in bakrov(II) sulfat pentahidrat. Ta test je v prvi vrsti odvisen od dveh kemijskih reakcij: redukcije bakra(II) v baker(I) s peptidnimi vezmi v beljakovinah in kelacije dveh molekul bicinhoninske kisline z bakrovim(I) ionom, kar ima za posledico vijolično obarvan kompleks, ki lahko absorbira svetlobo pri valovni dolžini 562 nm. Pri prvi reakciji je količina bakra(II), reduciranega s peptidnimi vezmi, sorazmerna s količino beljakovin v vzorcu.
Kaj je Bradfordov test?
Bradfordov test je spektroskopska analitična metoda, uporabna pri merjenju koncentracije beljakovin v raztopini. To metodo je leta 1976 razvila Marion M. Bradford in je sorazmerno hitra in natančna metoda.
Barvna reakcija proteina in Bradfordovega reagenta
S to metodo lahko določimo koncentracijo količine beljakovin v vzorcu. Kemična reakcija, ki poteka v vzorcu med tem testom, je odvisna izključno od aminokislinske sestave beljakovin v vzorcu.
Bradfordova metoda ocenjevanja beljakovin
Ko upoštevamo metodo tega testa, gre za kolorimetrični test beljakovin, ki temelji na absorbančnem premiku barvila z imenom Coomassie Brilliant Blue G-250. Na splošno to barvilo obstaja v treh oblikah: anionska (modra), nevtralna (zelena) in kationska (rdeča). Zato barvilo v kislih pogojih spremeni barvo iz rdeče v modro. To je posledica vezave beljakovine na barvilo. Nasprotno, če ni proteina, ki bi se vezal z barvilom, se sprememba barve ne pojavi, raztopina dobi rdeče-rjavo barvo. To barvilo je sposobno tvoriti močan, nekovalenten kompleks s karboksilno skupino proteina prek Van der Waalovih sil in elektrostatične privlačnosti.
Kakšna je razlika med BCA in Bradfordovim testom?
BCA in Bradfordov test sta dve metodi za določanje koncentracije beljakovin. Ta dva testa imata različna načela in razlike v natančnosti. Ključna razlika med BCA in Bradfordovim testom je, da je BCA test dolgotrajen in manj natančen, medtem ko je Bradfordov test hiter in natančen.
Naslednja infografika povzema razlike med BCA in Bradfordovim testom v obliki tabele.
Povzetek – BCA proti Bradfordovemu testu
BCA test ali test bicinhoninske kisline je biokemični test, uporaben pri določanju skupne koncentracije beljakovin v raztopini. Bradfordov test je spektroskopska analitična metoda, uporabna pri merjenju koncentracije beljakovin v raztopini. Ključna razlika med BCA in Bradfordovim testom je, da je BCA dolgotrajen in manj natančen, medtem ko je Bradfordov test hiter in natančen.
