Ključna razlika – CFU proti MPN
Enota, ki tvori kolonijo (CFU) in najverjetnejše število (MPN) sta dve metodi, ki se uporabljata za štetje mikroorganizmov v vzorcih. Oba parametra se uporabljata za odkrivanje kakovosti vode in fekalnih indikatorskih bakterij v vzorcih vode. Enota za tvorbo kolonije je mera, ki se uporablja za štetje števila sposobnih bakterijskih ali glivičnih celic v specifični prostornini ali teži danega vzorca. Standardna enota za ta parameter je CFU/ml ali CFU/g. Najverjetnejša številka je druga enota, ki se uporablja za merjenje števila živih bakterijskih celic v tekočem vzorcu. Ključna razlika med CFU in MPN je, da se CFU izračuna iz bakterijskih in glivičnih kolonij, ki rastejo na plošči s trdnim agarjem, medtem ko se MPN izračuna iz živih bakterij, ki rastejo v tekočem mediju.
Kaj je CFU?
Enota za tvorbo kolonij (CFU) je parameter, ki meri število sposobnih bakterijskih ali glivičnih celic v danem vzorcu. Metoda, ki šteje enote, ki tvorijo kolonije, se imenuje standardno štetje na plošči. Viabilne kolonije, ki se pojavijo na ploščah z agarjem, so izražene kot CFU na 1 ml (enota za tvorbo kolonije na mililiter) vzorca za tekočine ali CFU na 1 g (enota za tvorbo kolonije na en gram) vzorca za trdne snovi.
Za merjenje CFU v vzorcu se uporabljata dve pogosti metodi. Gre za metodo razpršene plošče in metodo nalivne plošče. Ti dve metodi podpira tehnika, imenovana serijsko redčenje. Serijsko razredčeni vzorci omogočajo pridobitev preštetega števila kolonij na površini agarja. Znano količino vzorca lahko razporedite po površini plošče z agarjem ali zmešate z agarjem in vlijete na ploščo. Ploščo nato inkubiramo in nastale kolonije preštejemo. Število kolonij je povezano s številom mikroorganizmov v prvotnem vzorcu. Plošče, ki kažejo preveč ali premalo kolonij, so izključene iz štetja, ker rezultati na teh ploščah morda niso statistično točni. Statistično gledano je najboljši razpon 30 – 300 kolonij na plošči z agarjem. Zato je treba za natančno štetje izbrati pravilne tablice. Za zgornjo funkcijo se izvede serijsko redčenje.
Ko preštejete število živih kolonij na ploščah, lahko CFU/ml izračunate z naslednjo enačbo.
CFU na ml originalnega vzorca=število kolonij na plošči X faktor redčenja
Faktor redčenja=(1/ Redčenje plošče)
Na primer, če dobite 149 kolonij na plošči z razredčino 10-4, lahko število bakterij v 1 ml prvotnega vzorca izračunate na naslednji način:
CFU/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 ali 1490000
=1. 49 x 106
Slika 01: Enota za oblikovanje kolonij
Kaj je MPN?
Najverjetnejša številka je alternativna mera CFU/ml. MPN prav tako oceni preživetje sposobnih celic v tekočem vzorcu. Šteje organizme, ki rastejo v tekoči kulturi, in je pretežno bakteriološka tehnika. Ta metoda je še posebej uporabna za vzorce, ki vsebujejo nizke koncentracije bakterijskih celic; na primer mleko, pitna voda itd. MPN vrednost je izražena za 100 ml volumna. MPN temelji na statistični metodi, ki temelji na teoriji verjetnosti. Obstajajo statistične tabele za ugotavljanje MPN vrednosti na 100 ml vzorca. Te tabele prikazujejo rezultate pri 95-odstotni meji zaupanja.
Vrednost MPN se izračuna po izvedbi tehnike, imenovane metoda fermentacije z več cevmi. Trije kompleti epruvet, ki vsebujejo primerno gojišče kulture, se nacepijo s tremi različnimi volumni vzorca, kot so 10 ml, 1 ml in 0.1 ml in inkubiramo za rast. Po inkubacijski dobi se epruvete ocenijo s + (pozitivno) ali – (negativno) za prisotnost ali odsotnost rasti. Vzorec pozitivnih in negativnih rezultatov se nato primerja s tabelo MPN statističnih verjetnosti, da se oceni število mikroorganizmov. Nato se poda vrednost MPN za 100 ml vzorca. MPN se pogosto uporablja za odkrivanje koliformnih bakterij, prisotnih v vzorcih vode.
Slika 02: Tabela MPN
Kakšna je razlika med CFU in MPN?
CFU proti MPN |
|
| CFU je merilo, ki se uporablja za izražanje števila sposobnih bakterijskih ali glivičnih kolonij v danem vzorcu. | MPN je alternativna mera CFU in meri število živih bakterijskih celic v tekočem vzorcu. |
| Enota | |
| CFU/ml ali CFU/g | MPN/100 ml |
| Izračun | |
| CFU se izračuna s štetjem števila kolonij, zraslih na ploščah z agarjem. | MPN se izračuna s primerjavo pozitivnih in negativnih vzorcev cevi s statistično tabelo MPN. |
| Tehnika serijske razredčitve | |
| Serijsko redčenje se izvede pred namestitvijo vzorcev na plošče z agarjem. | Serijsko redčenje se običajno ne izvede, ko se izračuna MPN |
| Metode | |
| Metoda razpršene plošče in metoda nalivne plošče sta dve vrsti metod, ki se izvajata za pridobivanje CFU. | Vrenje v več ceveh je metoda, ki se izvaja za pridobitev MPN vrednosti. |
Povzetek – CFU proti MPN
Merjenje mikrobne rasti je potrebno iz več razlogov. V obratih za predelavo hrane je potrebno meriti raven in vrsto mikroorganizmov v hrani. V prehrambeni industriji in medicini je treba zagotoviti učinkovito uporabo sterilizacijskih postopkov. V čistilnih napravah je treba redno meriti mikrobno število. Pri optimizaciji postopka v molekularni biologiji je potrebno izmeriti število kolonij na ploščah. Zato so na voljo različne metode štetja in merjenja rasti. CFU in MPN sta dve taki metodi, ki se široko uporabljata na različnih področjih. CFU je merilo števila sposobnih bakterijskih in glivičnih kolonij, prisotnih v danem vzorcu. Izračuna se z uporabo standardne metode štetja plošč ali metode štetja sposobnih plošč. MPN je drugo merilo, ki izraža število bakterijskih celic, prisotnih v danem volumnu tekočega vzorca. Izračuna se z uporabo metode fermentacije v več cevkah in tabele MPN. To je razlika med CFU in MPN.
Prenesite PDF različico CFU proti MPN
Lahko prenesete različico PDF tega članka in jo uporabite za namene brez povezave v skladu z opombami o citatih. Prenesite PDF različico tukaj. Razlika med CFU in MPN.
