Ključna razlika med hibridom kvasovk ena in hibridom kvasovk dva je ta, da je hibrid kvasovk in vitro in vitro test za analizo interakcij DNA-protein, medtem ko je hibrid kvasovk dva in vitro test za analizo interakcij beljakovin in beljakovin.
Preučevanje interakcij med celičnimi molekulami lahko pomaga definirati mesta prepoznavanja, ki sodelujejo pri izražanju genov in beljakovinskih poteh. Interakcije DNK in proteinov so sestavni del celičnih procesov, kot so modifikacije DNK in regulacija transkripcije itd. Po drugi strani pa igrajo interakcije proteinov in proteinov ključno vlogo v celičnih procesih, kot so replikacija, transkripcija, translacija in transdukcija signala. Zato je kritično pomembno identificirati te interakcije celičnih molekul z različnimi testi. Kvasovka en hibrid in kvasovka dva hibrida sta dva in vitro testa za analizo interakcij DNK-protein in protein-protein.
Kaj je Yeast One Hybrid?
Yeast one hybrid (Y1H) je test, ki temelji in vitro za analizo medceličnega medsebojnega delovanja DNK in beljakovin. To metodo sta prva vzpostavila Wang in Reed leta 1993. Od takrat je pokazala večjo moč v bioloških raziskavah. V tem testu sta dve glavni komponenti: DNK vaba in beljakovinski plen.
Slika 01: Yeast One Hybrid
V postopku se zaporedje DNK (vaba DNK) najprej klonira pred dvema različnima reporterjema (HIS3, LacZ). Ti reporterski konstrukti so integrirani v genom seva kvasovk. Transkripcijski faktorji se jemljejo kot beljakovinski plen. Transkripcijski faktorji so spojeni s transkripcijsko aktivacijsko domeno (AD) transkripcijskega faktorja Gal4 kvasovk, da se ustvarijo hibridni proteini. Ta celoten hibridni protein je integriran v plazmid, preden ga vnesemo v sev kvasovk. Po uvedbi rekombinantnega plazmida, ko transkripcijski faktor interagira s fragmentom DNA, del AD aktivira ekspresijo reporterskega gena (HIS3 ali LacZ). Sekvenciranje plazmidov omogoča identifikacijo transkripcijskega faktorja, ki se lahko veže na fragment DNA. Pred kratkim je bila za raziskovanje diagnoze bolezni uporabljena hibridna metoda kvasovk. Zato se bo ta test v prihodnosti bolj uporabljal v znanstvenih raziskavah in zdravljenju.
Kaj je Yeast Two Hybrid?
Yeast two hybrid (Y2H) je test, ki temelji in vitro za analizo znotrajceličnih beljakovin in interakcij med beljakovinami. To metodo sta prvotno odkrila Stanley Fields in Ok-Kyu Song leta 1989. Ta tehnika zaznava interakcije med beljakovinami z uporabo transkripcijskega faktorja Gal4 kvasovk.
Slika 02: Kvas dva hibrida
Pri tej metodi se najprej konstruirata dve fuziji (hibrida) z uporabo zanimivih proteinov: z zlitjem enega proteina z vezavno domeno DNA (DBD) in z zlitjem drugega proteina z aktivatorsko domeno (AD) transkripcijskega faktorja Gal4. Protein, spojen z DBD, je znan kot vaba, medtem ko je protein, spojen z AD, znan kot plen. V sevu kvasovk se po interakciji vabe in plena DBD in AD približata, da ustvarita funkcionalni transkripcijski faktor Gal4 pred reporterskim genom. Funkcionalni transkripcijski faktor aktivira ekspresijo reporterskega gena. Poleg tega se ta metoda trenutno uporablja za pregledovanje interakcij integralnih membranskih proteinov v celicah sesalcev.
Kakšne so podobnosti med hibridom Yeast One Hybrid in Yeast Two Hybrid?
- Kvasovka en hibrid in kvasovka dva hibrida sta dva in vitro temelječa testa za analizo interakcij DNK-protein in beljakovina-protein.
- Ti testi uporabljajo seve kvasovk.
- Oba testa uporabljata aktivacijsko domeno (AD) transkripcijskega faktorja Gal4.
- Uporabljajo izražanje reporterskega gena (HIS3 ali LacZ) za odkrivanje interakcij.
- Imajo vabo in plen.
- Oba testa sta zelo uporabna v sodobnih bioloških raziskavah.
Kakšna je razlika med hibridom kvasovk ena in hibridom kvasovk dva?
Yeast one hybrid je in vitro temelječ test za analizo interakcij DNK in beljakovin, medtem ko je kvasovka dva hibrida in vitro test za analizo beljakovin in interakcij beljakovin. To je torej ključna razlika med hibridom kvasa en in hibridom kvasa dva. Poleg tega je pri kvasovkah en hibrid vaba fragment DNK, plen pa proteinska molekula. Po drugi strani pa sta v kvasovkah dva hibrida, tako vaba kot plen, proteinske molekule.
Spodnja infografika navaja razlike med hibridom kvasovk ena in hibridom kvasovk dva v obliki tabele za vzporedno primerjavo.
Povzetek – Yeast One Hybrid proti Yeast Two Hybrid
Hibrid kvasovk ena in hibrid kvasovk dva sta pomembna testa, ki temeljita na in vitro. Hibrid kvasovk je in vitro temelječ test za analizo interakcij DNK in beljakovin, medtem ko je hibrid kvasovk dva in vitro test za analizo interakcij beljakovin in beljakovin. To je torej ključna razlika med hibridom kvasa ena in hibridom kvasa dva.
