Ključna razlika med izolacijo DNA in RNA je, da je izolacija DNA postopek, pri katerem se iz biološke celice ekstrahira vrsta nukleinske kisline, imenovana DNA, medtem ko je izolacija RNA postopek, pri katerem se vrsta nukleinske kisline, imenovana RNA, pridobljen iz biološke celice.
Izolacija nukleinske kisline je izhodišče v široki paleti nadaljnjih aplikacij. Visoka kakovost nukleinskih kislin v začetnih vzorcih je ključni dejavnik za uspeh kasnejših nadaljnjih aplikacij. Izolacijo nukleinske kisline bi lahko opredelili kot niz korakov za pridobitev nukleinske kisline v vzorcu čistosti, ki se lahko uporabi za različne nadaljnje korake aplikacije. Namen ekstrakcije nukleinske kisline je razkrojiti celično membrano in doseči največjo eliminacijo lipidov in beljakovin, da dobimo čiste nukleinske kisline, kot sta DNA ali RNA.
Kaj je izolacija DNK?
Izolacija DNK je rutinski postopek, pri katerem se vrsta nukleinske kisline, imenovane DNK, ekstrahira iz biološke celice. Izolacijo DNK izvedemo z ekstrakcijo DNK iz krvi, vzorcev zamrznjenega tkiva in blokov parafinskega tkiva. Obstajajo trije glavni koraki pri izolaciji DNK, vključno z lizo celice, ekstrakcijo DNK in precipitacijo. Pri celični lizi so celice v vzorcu ločene druga od druge pogosto s fizičnimi sredstvi, kot je mletje ali vrtinčenje, in dane v raztopino, ki vsebuje sol. Običajno pozitivno nabiti natrijevi ioni v soli pomagajo zaščititi negativno nabite fosfatne skupine, ki potekajo vzdolž hrbtenice DNK. Kasneje se doda detergent za razgradnjo lipidov v celični membrani in jedrih, ki sproščajo DNK, ko so te membrane motene.
Slika 01: Izolacija DNK
Ekstrakcija DNK se izvede, da dobimo čist vzorec DNK. Pogosto je dodan encim proteaza za razgradnjo proteinov, povezanih z DNA, in drugih celičnih proteinov. Poleg tega je mogoče nekaj celičnih ostankov odstraniti s filtriranjem vzorca. Na koncu se DNK obori z uporabo alkohola. Poleg tega, če je DNK veliko, je na koncu postopka mogoče opaziti skopo belo oborino.
Kaj je izolacija RNA?
Izolacija RNA je postopek, pri katerem se vrsta nukleinske kisline, imenovane RNA, ekstrahira iz biološke celice. Ta postopek je pogosto zapleten zaradi prisotnosti encimov ribonukleaze v celicah in tkivih, ki razgrajujejo RNA. V molekularni biologiji se uporablja več metod za izolacijo RNK iz vzorcev, kot je ekstrakcija gvanidinij-tiocianat-fenol-kloroform.
Slika 02: Izolacija RNA
Izolacija RNK je običajno sestavljena iz več korakov, vključno z lizo in homogenizacijo celic, dušenjem biokemičnih procesov, delitvijo nukleinske kisline, pridobivanjem RNK, surovim čiščenjem in oceno kakovosti RNK. Metoda lize in elucije na osnovi filtrirnega papirja ima visoko prepustnost pri ekstrakciji RNA. Poleg tega je zelo uporabna metoda tudi ekstrakcija RNA v tekočem dušiku z terilnico in pestilom, saj preprečuje aktivnost ribonukleaze.
Kakšne so podobnosti med izolacijo DNA in RNA?
- Izolacija DNA in RNA sta dve vrsti postopkov izolacije nukleinske kisline.
- Postopka imata podobne osnovne korake, kot so liza celic, ekstrakcija in čiščenje.
- Ti postopki izolirajo pomembne vrste nukleinskih kislin, ki imajo številne nadaljnje uporabe.
- Izvajajo se v laboratorijskih napravah.
- Izvajajo se lahko z uporabo izdelanih kompletov.
Kakšna je razlika med izolacijo DNA in RNA?
Pri izolaciji DNA se iz biološke celice ekstrahira vrsta nukleinske kisline, imenovana DNA, medtem ko se pri izolaciji RNA iz biološke celice ekstrahira vrsta nukleinske kisline, imenovana RNA. To je torej ključna razlika med izolacijo DNA in RNA. Poleg tega se izolacija DNA običajno izvaja pri približno pH 7 do 8, medtem ko se izolacija RNA običajno izvaja pri približno pH 4,5.
Spodnja infografika predstavlja razlike med izolacijo DNA in RNA v obliki tabele za vzporedno primerjavo.
Povzetek – izolacija DNK proti RNK
Izolacija DNA in RNA sta dve vrsti postopkov izolacije nukleinske kisline. Izolacija DNK je postopek, med katerim DNK ekstrahiramo iz biološke celice. Izolacija RNA je postopek, med katerim se RNA ekstrahira iz biološke celice. To je torej ključna razlika med izolacijo DNA in RNA.
