Ključna razlika – barvanje po gramu proti kulturi
Barvanje po Gramu je tehnika barvanja, ki se izvaja za razlikovanje bakterij v dve skupini glede na debelino plasti peptidoglikana v njihovi celični steni. Kultura je metoda gojenja in vzdrževanja mikroorganizmov v laboratorijskih pogojih za različne analize. Ključna razlika med gramskim madežem in kulturo je njihova funkcija; sev po Gramu tehnika barvanja bakterij, kjer je kultura metoda gojenja in vzdrževanja mikroorganizmov.
Kaj je barvanje po Gramu?
Barvanje po Gramu je pomembna tehnika diferencialnega barvanja, ki se uporablja za identifikacijo bakterij v mikrobiologiji. To tehniko je uvedel danski bakteriolog Hans Christian Gram leta 1884. Barvanje po Gramu kategorizira bakterije v dve veliki skupini: gram pozitivne in gram negativne; ti so zelo pomembni pri razvrščanju in identifikaciji bakterij. Barvanje po Gramu se izvaja kot začetni korak za karakterizacijo bakterij.
Bakterije so razvrščene glede na razlike v njihovi celični steni. Po Gramu pozitivne bakterije vsebujejo debelo plast peptidoglikana v svoji celični steni, medtem ko imajo gramnegativne bakterije tanko plast peptidoglikana v svoji celični steni, kot je prikazano na sliki 01. Rezultat barvanja po Gramu bo temeljil na razliki v debelini peptidoglikanske plasti celična stena.
Slika 1: Po Gramu pozitivne bakterije in po Gramu negativne bakterije
Barvanje po gramih se izvede z uporabo štirih različnih reagentov in sicer; primarno lazuro, jedkalno sredstvo, sredstvo za razbarvanje in kontra lazuro. Kristalno vijolična in safranin služita kot primarno in nasprotno barvilo, medtem ko gram joda in 95-odstotni alkohol služita kot jedko sredstvo oziroma razbarvalno sredstvo.
Osnovni koraki barvanja po gramih
- Bakterijski bris pripravimo na čistem predmetnem stekelcu, ga segrejemo in ohladimo.
- Brisek prelijemo s kristalno vijolično za 1 – 2 minuti.
- Mas se spere s počasi tekočo vodo iz pipe, da se odstranijo odvečni madeži.
- Gram joda nanesemo na bris za 1 minuto.
- Brisek speremo s počasi tekočo vodo iz pipe
- Brisek speremo s 95% alkoholom 2 – 5 sekund in izperemo s počasi tekočo vodo iz pipe.
- Bris se protibarva s safraninom 1 minuto
- Bris speremo s počasi tekočo vodo iz pipe, posušimo in opazujemo pod mikroskopom.
Na koncu barvanja po Gramu bodo gram-negativne bakterije rožnate, medtem ko bodo gram-pozitivne bakterije vijoličaste, kot je prikazano na sliki 02. Rezultat barvanja po gramih je odvisen od debeline plasti peptidoglikana v njihovi celični steni. Med korakom razbarvanja se primarni madež in jedkasto sredstvo enostavno odstranita iz gram negativnih bakterij in postaneta brezbarvna, saj imata tanko peptidoglikansko plast. Primarni madež se ohrani v gram pozitivnih bakterijah, saj imajo debelo peptidoglikansko plast. Protibarvanje ne bo učinkovito za gram pozitivne bakterije zaradi zadrževanja primarnega madeža. Tako bodo gram pozitivne bakterije vidne v primarni barvi madežev, tj. vijolični barvi. Protibarvanje bo obarvalo gramnegativne bakterije in bo vidno v barvi izbire, ki je barva safranina. Zato je bakterije enostavno kategorizirati v dve skupini z barvanjem po gramu in je dragoceno pri diferenciaciji in identifikaciji bakterij.
Slika 2: Gram Sev
Kaj je kultura?
Mikrobna kultura je metoda gojenja in vzdrževanja mikroorganizmov v laboratorijskih pogojih za različne namene. Kulture gojimo v trdnih, poltrdnih in tekočih gojiščih glede na vrsto in namen gojenja mikroorganizma. Kulture dobijo potrebna hranila in pogoje za rast, ki jih potrebujejo mikroorganizmi. Obstajajo različne komponente gojišča, kot so vir energije, vir ogljika, vir dušika, minerali, mikrohranila, voda, sredstvo za strjevanje itd. Optimalno temperaturo, kisik in pH je treba prilagoditi glede na vrsto gojenega mikroorganizma.
Obstajajo različne vrste mikrobnih kultur; na primer serijsko kulturo, kontinuirano kulturo, vbodno kulturo, kulturo na plošči z agarjem, jušno kulturo itd. Glede na sestavo rastnega medija obstajajo različne vrste gojišč, znanih kot sintetična gojišča, polsintetična gojišča in naravna gojišča. Mikrobne kulture se pripravljajo v sterilnih pogojih v posebni komori, imenovani laminarni zračni tok. Rastni medij in steklovina se sterilizirata pred inokulacijo želenega mikroorganizma. V ustreznih sterilnih pogojih tarčni mikroorganizem prenesemo v steriliziran hranilni medij in inkubiramo pri optimalni temperaturi. Znotraj gojišča bodo mikroorganizmi rasli in se razmnoževali z uporabo zagotovljenih hranil.
Slika 3: Bakterijska kultura na plošči
Kakšna je razlika med barvanjem po Gramu in kulturo?
Madež po Gramu proti kulturi |
|
| Gramsov sev je tehnika diferencialnega barvanja, ki se uporablja za diferenciacijo in identifikacijo bakterij. | Mikrobna kultura je metoda gojenja mikroorganizmov v laboratoriju. |
| Komponente | |
| To uporablja različne reagente, vključno z dvema madežema. | To uporablja različne gojišča, kot so trdna, poltrdna in tekoča gojišča, sestavljena iz hranil in drugih potrebnih pogojev. |
| Osnovne funkcije | |
| To omogoča združevanje bakterij v dve skupini: gram negativne in gram pozitivne. | To omogoča razmnoževanje mikroorganizmov za različne namene. |
| Osnova | |
| Izid barvanja po Gramu temelji na razlikah v peptidoglikanski plasti celične stene. | Mikroorganizmi bodo rasli in se razmnoževali znotraj gojišča. |
| Izid | |
| Gram negativne bakterije so vidne v rožnati barvi, gram pozitivne bakterije pa v vijolični barvi. | Na ploščah so vidne kolonije mikroorganizmov. Na tekočih medijih so mikroorganizmi v suspendirani obliki. |
Povzetek – Barvanje po Gramu proti kulturi
Mikrobne kulture se pripravijo in vzdržujejo v laboratorijskih pogojih za različne namene, kot so shranjevanje, testiranje, kemično čiščenje itd. Barvanje po Gramu je postopek obarvanja, ki loči bakterije v dve glavni skupini, imenovani po Gramu negativne bakterije in po Gramu pozitivne bakterije. Zato je razlika med barvanjem po gramu in kulturo ta, da je barvanje po gramu tehnika barvanja bakterij, medtem ko je kultura metoda gojenja in vzdrževanja mikroorganizmov v laboratorijih.
