Ključna razlika med imunoprecipitacijo in koimunoprecipitacijo je v tem, da je imunoprecipitacija tehnika, ki obori protein iz raztopine z uporabo specifičnega protitelesa, medtem ko je koimunoprecipitacija tehnika, ki obori nedotaknjene proteinske komplekse iz raztopine z uporabo specifičnega protitelesa.
Interakcija antigen-protitelo je specifična kemična interakcija med protitelesi, ki jih proizvajajo celice B, in antigeni (proteini) med imunsko reakcijo. Običajno se topni antigeni združijo s topnimi protitelesi v prisotnosti elektrolita pri topni temperaturi in pH, da nastane netopen vidni kompleks. To se imenuje reakcija padavine. Zato sta imunoprecipitacija in koimunoprecipitacija dve vrsti reakcij obarjanja, ki se redno uporabljata v laboratorijih za identifikacijo beljakovin, kot so antigeni.
Kaj je imunoprecipitacija?
Imunoprecipitacija je tehnika obarjanja proteina iz raztopine z uporabo specifičnega protitelesa. Včasih je ta tehnika znana tudi kot individualna imunoprecipitacija beljakovin. Imunoprecipitacija uporablja protitelo za izolacijo izbranega zanimivega proteina iz celičnega lizata. Protitelo očisti svoj specifični ciljni protein ali antigen iz mešanice. Protitelo se veže na beljakovino in kompleks protitelo-antigen se izvleče iz vzorca. V eksperimentalni nastavitvi se kompleks antigen-protitelo izvleče z uporabo proteina A/G sklopljene agaroze ali magnetnih kroglic. Kasneje se kroglice sperejo in beljakovina, ki nas zanima, se eluira. Očiščen protein ali antigen, pridobljen z imunoprecipitacijo, se preveri z različnimi tehnikami, kot sta encimski imunski test (ELISA) in western blot (WB).
Slika 01: Imunoprecipitacija
Poleg tega je mogoče izolirane proteine ali antigene kvantificirati in identificirati z masno spektrometrijo z uporabo vzorcev encimske prebave, ki temeljijo na primarnem zaporedju. Preden začnete z imunoprecipitacijskim poskusom, je nekaj premislekov: izbira formata metode, vezavni proteini in kroglice, izbira pravega primarnega protitelesa in izotipa ter negativna kontrola.
Kaj je koimunoprecipitacija?
Koimunoprecipitacija je tehnika obarjanja intaktnih proteinskih kompleksov iz raztopine z uporabo specifičnega protitelesa. Koimunoprecipitacija na splošno deluje tako, da izbere specifično protitelo, ki cilja na znano beljakovino (antigen), za katero se domneva, da je član večjega kompleksa beljakovin. Z ciljanjem na znanega člana s specifičnim protitelesom je mogoče iz raztopine potegniti celoten proteinski kompleks. To omogoča identifikacijo neznanih članov kompleksa. Koncept vlečenja proteinskih kompleksov iz raztopine se včasih imenuje mehanizem "pull-down".
Slika 02: B Koimunoprecipitacija
Koimunoprecipitacija je zmogljiva tehnika, ki se uporablja za analizo interakcij protein-protein. Glavni namen koimunoprecipitacije je identifikacija medsebojno delujočih partnerjev, kot so ligandi, kofaktorji ali signalne molekule za protein, ki nas zanima. Poleg tega je koimunoprecipitacija učinkovita tehnika, ki se uporablja za ločevanje beljakovin iz seruma, celičnega lizata, homogeniziranega tkiva ali kondicioniranih medijev.
Kakšne so podobnosti med imunoprecipitacijo in koimunoprecipitacijo?
- Imunoprecipitacija in koimunoprecipitacija sta dve vrsti tehnik, ki temeljita na reakciji precipitacije.
- Obe tehniki se lahko uporabita za identifikacijo ciljnega antigena preko specifičnega protitelesa.
- Obe tehniki sta močno odvisni od interakcije antigen-protitelo.
- Rutinsko se uporabljajo v kliničnih laboratorijih.
Kakšna je razlika med imunoprecipitacijo in koimunoprecipitacijo?
Imunoprecipitacija je tehnika, ki obori protein iz raztopine z uporabo specifičnega protitelesa, medtem ko je koimunoprecipitacija tehnika, ki obori nedotaknjene proteinske komplekse iz raztopine z uporabo specifičnega protitelesa. To je torej ključna razlika med imunoprecipitacijo in koimunoprecipitacijo. Poleg tega se imunoprecipitacija pogosteje uporablja v laboratorijih, medtem ko se koimunoprecipitacija v laboratorijih običajno ne uporablja.
Spodnja infografika predstavlja razlike med imunoprecipitacijo in koimunoprecipitacijo v obliki tabele za vzporedno primerjavo.
Povzetek – imunoprecipitacija proti koimunoprecipitaciji
Imunoprecipitacija in koimunoprecipitacija sta dve vrsti tehnik, ki temeljita na reakciji precipitacije in sta odvisni od interakcije antigen-protitelo. Tehnika imunoprecipitacije obori protein iz raztopine z uporabo specifičnega protitelesa, medtem ko tehnika koimunoprecipitacije obori nedotaknjene proteinske komplekse iz raztopine z uporabo specifičnega protitelesa. Torej, to povzema razliko med imunoprecipitacijo in koimunoprecipitacijo.
