Ključna razlika med mikronukleusnim in kometnim testom je, da je mikronukleusni test pomemben za preverjanje kromosomskih poškodb kot posledice izpostavljenosti mutagenom, medtem ko je kometni test pomemben za odkrivanje primarnih poškodb DNK v posameznih celicah.
Testi genotoksičnosti pomagajo oceniti možnosti mutacij in kromosomskih nepravilnosti. Genotoksini vključujejo kemične snovi in sevanje. Karcinogeni, mutageni in teratogeni so glavne kategorije genotoksinov. Povzročajo različne poškodbe, kot so točkaste mutacije, delecije, prelomi enojne in dvojne verige, kromosomske aberacije, tvorbe mikronukleusov, popravila DNA in interakcije celičnega cikla. Takšna stanja lahko vodijo do številnih bolezni, testi genotoksičnosti pa preprečujejo morebitno škodo zaradi teh stanj. Mikronukleusni test in kometni test sta dve tehniki v testih genotoksičnosti.
Kaj je mikronukleusni test?
Mikronukleusni test je test za oceno kromosomske poškodbe kot posledice izpostavljenosti mutagenom. Pomemben je pri pregledovanju kemikalij, ki povzročajo nastanek vretena in mikrojeder. Mikronukleusni test zagotavlja informacije o stabilnosti kemikalij, kadar posegajo v strukturo in delovanje kromosomov. Številne rakotvorne snovi so pozitivne pri mikronukleusnih testih. Postopek testiranja vključuje kemično obdelavo in merjenje frekvence celic z mikrojedri. Če pride do nenormalnega povečanja števila mikronukleusnih celic, sklepa, da kemikalija povzroča kromosomske poškodbe.
Mikronukleusni test se običajno izvaja na celicah, ki se aktivno delijo. Zato so eritrociti in izvorne celice kostnega mozga, proizvedene z delitvijo celic, idealni kandidati za takšne teste. Doživljajo stalno in hitro menjavo. Ker eritrociti nimajo pravega jedra, postanejo mikronuklearne celice bolj vidne na koncu testa.
Slika 01: Opazovanje testa mikronukleusa
Mikronukleusni testi so ekonomični, hitrejši, priročni in zahtevajo manj spretnosti za izvedbo. Hitro in zanesljivo odražajo kromosomske aberacije in so izjemno uporabni za hitro oceno kromosomskih poškodb. Posebna in vsestranska vrsta mikronukleusnega testa je citokinezni blok mikronukleusnega citoma (CBMNcyt). To je najprimernejši test za merjenje kromosomskih poškodb in nestabilnosti v celicah. Vendar pa je glavni problem uporabe mikronukleusnega testa ta, da ne more določiti različnih vrst kromosomskih aberacij, test pa vpliva na hitrost mitoze in delež celične smrti, zaradi česar se rezultati spremenijo.
Kaj je Comet Assay?
Kometni test, ki je znan tudi kot test elektroforeze z enim gelom, je preprosta in občutljiva tehnika za odkrivanje poškodb DNK. Meri prekinitve DNK v evkariontskih celicah in je standardna tehnika za biomonitoring in testiranje genotoksičnosti.
Kometni test je vključen v inkapsulacijo celic v suspenzijo agaroze z nizkim tališčem, lizo celic v nevtralnih ali alkalnih pogojih in elektroforezo suspendiranih liziranih celic. Med postopkom inkapsulacije so celice suspendirane v staljeni agarozi z nizkim tališčem, agaroza pa tvori matriko vlaken ogljikovih hidratov, da jih zasidra na mestu. Agaroza je osmotsko nevtralna; zato omogoča, da raztopine prodrejo skozi gel in vplivajo na celice, ne da bi jih motile in premikale. Raztopina za lizo je visoko koncentrirana vodna raztopina soli in detergent. Ta sol moti beljakovine in vezne vzorce znotraj celice, hkrati pa moti vsebnost RNA v celici. Celice se uničijo in vsi proteini, RNK, citoplazmatske in nukleoplazmatske sestavine, se razgradijo in razpršijo v agarozni matriks, pri čemer zapustijo DNK.
Slika 02: Test kometa
Raztopina za elektroforezo je alkalna raztopina, kjer dvojna vijačnica DNA denaturira in nukleoid postane enoverižni. Med tem postopkom se za analizo slik uporabi električno polje. Analiza slike meri celotno intenzivnost fluorescence za DNK in nukleoid ter oba primerja. Celotna struktura je podobna kometu s krožno glavo, ki ustreza preostali nepoškodovani DNK, in repom za poškodovano DNK. Svetlejši in daljši kot je rep zaradi močnejših signalov, višja je stopnja škode.
Kakšne so podobnosti med testom mikronukleusa in kometa?
- Mikronukleus in kometni test sta ekonomična, hitrejša, priročna in zahtevata manj spretnosti.
- Izvajajo se predvsem na DNK.
- Obe testi pomagata pri ocenjevanju mutacij in kromosomskih nepravilnosti.
- Poleg tega obe tehniki za izvedbo postopka uporabljajo kemikalije.
Kakšna je razlika med testom mikronukleusa in kometa?
Mikronukleusni test je pomemben pri preverjanju kromosomske poškodbe kot posledice izpostavljenosti mutagenom, medtem ko je kometni test pomemben pri odkrivanju primarnih poškodb DNK v posameznih celicah. To je torej ključna razlika med testom mikronukleusa in kometa. Poleg tega je mikronukleusni test dobro uveljavljen za odkrivanje klastogenosti in anevgenosti. Test kometa se uporablja kot test genotoksičnosti za odkrivanje primarne poškodbe DNK v celicah. Poleg tega mikronukleusni test zagotavlja informacije o stabilnosti kemikalij, medtem ko je kometni test enocelična gelska elektroforeza.
Spodnja infografika predstavlja razlike med testom mikronukleusa in kometa v obliki tabele za vzporedno primerjavo.
Povzetek – Test mikronukleusa proti kometu
Testi genotoksičnosti pomagajo oceniti možnosti mutacij in kromosomskih nepravilnosti. Mikronukleusni test in kometni test sta dve tehniki v okviru testov genotoksičnosti. Mikronukleusni test ocenjuje kromosomske poškodbe kot posledico izpostavljenosti mutagenom. Comet test je preprosta in občutljiva tehnika za odkrivanje poškodb DNK. Torej, to je ključna razlika med testom mikronukleusa in kometa. Mikronukleusni test je pomemben pri presejanju kemikalij, ki povzročajo nastanek vretena in mikronukleusov. Comet test je vključen v inkapsulacijo celic v suspenzijo agaroze z nizkim tališčem, lizo celic v nevtralnih ali alkalnih pogojih in elektroforezo suspendiranih liziranih celic.
