Transformacija proti transfekciji
Transformacija in transfekcija sta dve preprosti tehniki, ki se uporabljata za vnos tujega gena v gostiteljsko celico. Vendar so te tehnike odvisne od vrste gostitelja ali vektorskih sistemov.
Kaj je preoblikovanje celic?
Transformacija je tehnika, ki se uporablja za vnos genov v celice kvasovk in bakterij. Ta tehnika običajno povzroči dedne spremembe v genih, zato je izražanje gena trajno. Bakterijsko transformacijo je leta 1928 prvič uvedel Frederick Griffith. Nato je bila v zgodnjih sedemdesetih letih prejšnjega stoletja ta tehnika uporabljena v E.coli. Med procesom transformacije E. coli so celice namočene v ledeno mrzli raztopini CaCl2 Ta korak naredi celice E.coli kompetentne. Po tem se kompetentne celice zmešajo s plazmidno DNA in se inkubirajo na ledu 20-30 minut. Nato se izvede kratek toplotni šok, da se omogoči prenos DNK v celico. Nazadnje se celice dajo v hranilno juho in inkubirajo pri 37 °C 60–90 minut, da se vzpostavijo plazmidi. Ko so ti koraki uspešno zaključeni, lahko transformirane celice položimo na primeren medij za razmnoževanje celic. Ker transformacija velja za neučinkovito tehniko, je ni mogoče uporabiti za pripravo bank klonov.
Kaj je transfekcija celic?
Transfekcija je metoda vnosa tujega gena, običajno v celice sesalcev. Obstajata dva načina transfekcije; namreč prehodna transfekcija in stabilna transfekcija. Pri prehodni transfekciji je izražanje genov na voljo omejen čas; tako sprememba gena povzroči začasno izražanje. Ta metoda transfekcije je preprosta in hitra; zato se lahko uporablja rutinsko. Ena pomanjkljivost prehodne transfekcije je težava pri uporabi za sisteme za sintezo beljakovin v velikem obsegu.
Med stabilno transfekcijo se ciljni gen integrira v genom gostiteljske celice, zato je izražanje genov trajno, za razliko od prehodne transfekcije.
Kakšna je razlika med transformacijo in transfekcijo?
• Transformacija je vnos gena v prokariontsko celico (bakterijsko in kvasovko), medtem ko se transfekcija običajno imenuje vnos gena v celico sesalca.
• Transformacija povzroči dedno spremembo v genih, medtem ko lahko transfekcija povzroči bodisi začasno izražanje bodisi trajne spremembe v genih.
