Ključna razlika – neposredni proti indirektnemu ELISA
Encimski imunski test (ELISA), znan tudi kot encimski imunski test, je serološki test, ki odkriva protitelesa v krvi. Uporablja se kot diagnostično orodje za ugotavljanje, ali je bil bolnik izpostavljen določeni vrsti virusa ali drugemu povzročitelju okužbe (antigenu) in ali je telo proizvedlo protitelesa proti okužbi. ELISA lahko tudi identificira pretekle in trenutne okužbe. Zato zdravniki pred poglobljeno analizo bolezni pogosto uporabljajo ELISA kot presejalni test. Ta test se lahko izvede v laboratoriju z odvzemom vzorca krvi bolnika. Obstajata dve vrsti testa ELISA: neposredni ELISA in posredni ELISA. Ključna razlika med direktnim in indirektnim testom ELISA je v tem, da je indirektni test ELISA bolj občutljiv in zahteva dodatek sekundarnega protitelesa, medtem ko je neposredni test ELISA manj občutljiv in uporablja samo primarno protitelo.
Kaj je Direct ELISA?
ELISA je diagnostični test bolezni, ki se izvaja za ugotavljanje prisotnosti določenih antigenov ali protiteles v krvi. Izvaja se kot test na plošči. Uporablja protitelesa, povezana z encimi, ki jih je enostavno testirati. Prisotnost antigenov v vzorcu seruma se veže s specifičnimi protitelesi, povezanimi z encimi. V zadnjem koraku se doda poseben substrat, ki reagira z encimom. Encim pretvori substrat v obarvan ali produkt, ki proizvaja signal. Sprememba barve kemičnega substrata razkrije prisotnost določenega protitelesa v vzorcu seruma. Neposredni test ELISA uporablja samo primarno protitelo, povezano z encimom. Po vezavi na antigen hitro spremeni barvo, kar kaže na prisotnost povzročitelja okužbe v krvi. Vendar pa je intenzivnost signalov šibkejša pri neposrednem testu ELISA, saj so epitopi omejeni na vezavo antigenov. Zato je direktna ELISA manj občutljiva v primerjavi z indirektno ELISA.
Slika 01: Neposredni test ELISA
Kaj je indirektna ELISA?
ELISA se lahko izvede z uporabo dveh vrst protiteles in sicer; primarno protitelo in sekundarno protitelo. Indirektno orodje ELISA uporablja obe vrsti protiteles za ojačanje signalov za boljše odkrivanje. Indirektna tehnika ELISA se izvaja na naslednji način.
- Plošče inkubiramo z antigeni in speremo, da blokiramo nespecifično vezavo.
- Nato dodamo primarna protitelesa in jih speremo.
- Dodamo in speremo sekundarna protitelesa, vezana na encim.
- Dodan je substrat, ki reagira z encimi.
- Signali se zaznajo in ugotovi se prisotnost ali odsotnost specifičnega antigena v vzorcu.
Pri posrednem testu ELISA se lahko več sekundarnih protiteles veže na eno samo primarno protitelo. Sekundarna protitelesa so povezana z encimi, ki jih je enostavno testirati. Zato lahko ena vezava povzroči močan signal zaradi več kot ene interakcije. Zato je indirektna ELISA bolj občutljiva od neposredne ELISA. Vendar lahko indirektna ELISA povzroči nespecifične signale zaradi navzkrižnih reakcij sekundarnih protiteles.
Slika 02: Indirektni test ELISA
Kakšna je razlika med direktnim in indirektnim testom ELISA?
Neposredni vs. Indirektni ELISA |
|
| Neposredna ELISA je manj občutljiva v primerjavi z indirektno ELISA. | Indirektna ELISA je bolj občutljiva. |
| Porabljen čas | |
| Neposredni test ELISA je hiter postopek. | Indirektna ELISA je dolgotrajna. |
| Uporaba protiteles | |
| V direktni ELISA testu se uporablja samo ena vrsta protiteles (primarna protitelesa). | Primarna in sekundarna protitelesa se uporabljajo za indirektno ELISA. |
| Povezava z encimi | |
| Primarna protitelesa so povezana z encimi. | Sekundarna protitelesa so povezana z encimi. |
| Navzkrižna reaktivnost sekundarnih protiteles | |
| Direct ELISA odpravi navzkrižno reaktivnost drugih protiteles. | Na posredni ELISA vpliva navzkrižna reaktivnost drugih protiteles. |
| Signali | |
| Signali so šibki v primerjavi z indirektno ELISA. | Signali so pomnoženi pri posrednem testu ELISA. Zato ga je enostavno zaznati. |
Povzetek – Neposredna proti posredni ELISA
ELISA je biokemična tehnika, ki se uporablja predvsem v imunologiji za odkrivanje prisotnosti protitelesa ali antigena v krvnem vzorcu bolnika. Izvede se lahko z dvema postopkoma, znanima kot neposredni ali posredni ELISA. Neposredni test ELISA uporablja samo primarna protitelesa za odkrivanje antigena, medtem ko indirektni test ELISA uporablja primarna in sekundarna protitelesa. Pri direktni ELISA so označena primarna protitelesa, medtem ko so pri indirektni ELISA označena sekundarna protitelesa. To je razlika med neposrednim in posrednim testom ELISA.
