Ključna razlika – transformanti proti rekombinantom
Rekombinacija in transformacija sta dva ključna koraka v genskem inženirstvu, kjer se lastnosti organizma namenoma spremenijo z manipulacijo njegovega genskega materiala. Rekombinacija je proces, pri katerem se tuja DNA vključi v vektorski genom in nastane rekombinantna molekula DNA. Transformacija je naslednji korak, v katerem se rekombinantna molekula vnese v gostiteljski organizem. Gostiteljska celica ali organizem olajša izražanje rekombinantne molekule. Ključna razlika med transformanti in rekombinanti je, da so transformanti celice ali organizmi, ki sprejmejo rekombinantno molekulo in olajšajo izražanje, medtem ko so rekombinanti vektorji, ki omogočajo vstavljanje tuje DNK v njen genom in transport v gostiteljske transformante za izražanje.
Kaj so transformanti?
Transformanti so celice ali organizmi, v katerih je rekombinantna DNK prevzeta za izražanje. Bakterije se običajno uporabljajo kot gostiteljski organizmi v genskem inženiringu, saj jih je enostavno gojiti, razmnoževati in ravnati v laboratorijskih pogojih, proces transformacije pa je enostaven v primerjavi z drugimi organizmi. Najbolj priljubljena gostiteljska bakterija, ki se uporablja v genskem inženiringu, je bakterija E coli.
Med procesom transformacije so gostiteljske celice inducirane, da sprejmejo rekombinante. Vendar nekatere gostiteljske celice ne sprejmejo rekombinantnih molekul. Znani so kot netransformanti, celice, ki vsebujejo rekombinantne molekule DNK, pa kot transformanti. Izbira transformantov od netransformantov poteka z uporabo izbirnih markerjev v molekularni biologiji. Izbirni markerji se vstavijo v vektorski genom skupaj z vstavkom DNK. Običajno uporabljeni izbirni markerji so geni, odporni na antibiotike. Markerski geni olajšajo diferenciacijo transformantov in nadaljujejo proces. Po procesu transformacije bakterijo gojimo v mediju, ki vsebuje antibiotik. Samo transformanti so sposobni rasti na tem mediju, saj imajo v sebi rekombinante.
Ko se molekula rekombinantne DNK transformira v gostiteljskem organizmu, se lahko tuja DNK integrira v genom gostiteljske celice ali ostane neintegrirana v citoplazmi. Vendar se ekspresija in replikacija tuje DNK pojavita v gostiteljskem organizmu in povzročita želeni rezultat procesa.
Kaj so rekombinanti?
Rekombinant je organizem ali celica, ki ima rekombiniran genom, ki vsebuje tujo DNK. Rekombinanti so rezultat procesa genskega inženiringa. Umetno so izdelani in vitro z vstavljanjem zanimivih genov in spreminjanjem genoma. Pogosto bakterijski plazmidi in bakteriofagi delujejo kot rekombinanti v genskem inženirstvu. Ima himero različnih DNK. Rekombinantna molekula DNK prenaša tujo DNK v gostiteljski organizem in poskrbi, da se izraža in tvori želeni produkt.
Rekombinantne molekule so zgrajene z uporabo restrikcijskih endonukleaz in DNA ligaz. Želeni fragment DNK se loči od prvotnega organizma in vstavi v vektor, da se naredi rekombinant za transformacijo. Rezanje zanimivega gena in odpiranje vektorskega organizma je treba opraviti z uporabo istega restrikcijskega encima, da se ustvarijo združljivi lepljivi konci, ki jih povežejo skupaj. Ko je tuja DNK vključena v vektorski genom, je znana kot rekombinantna ali rekombinantna molekula DNK.
Slika 02: Rekombinantna DNK
Kakšna je razlika med transformanti in rekombinanti?
Transformanti proti rekombinantom |
|
| Transformanti so celice, ki imajo v sebi rekombinantno molekulo DNK. | Rekombinanti so nosilne molekule, ki imajo v svoj genom vstavljeno tujo DNK. |
| Izražanje tuje DNK | |
| So gostiteljske celice, ki lahko izražajo rekombinantno DNK. | Morali bi biti sposobni samopodvajati znotraj gostiteljskega organizma. |
| Izbor | |
| Celice, ki jih je mogoče preprosto gojiti in razmnoževati, so izbrane kot gostiteljske celice. | Morajo biti zlahka izvlečeni in morajo vsebovati izbirne oznake. |
Povzetek – Transformanti proti rekombinantom
Transformanti so celice ali organizmi z rekombinantnimi molekulami DNA v njih. Rekombinanti so organizmi ali celice, ki so bile podvržene genetski rekombinaciji in imajo v svojih genomih tujo DNK. Bakterijske celice se pogosto uporabljajo kot gostiteljske celice za transformacijo, plazmidi in bakteriofagi pa se pogosto uporabljajo kot vektorji v tehnologiji rekombinantne DNK. To je razlika med transformanti in rekombinanti.
