Ključna razlika med kompetitivnim in nekompetitivnim testom ELISA je v tem, da kompetitivni test ELISA uporablja inhibicijski antigen, medtem ko nekompetitivni test ELISA ne uporablja inhibicijskega antigena za test.
Encimski imunosorbentni test (ELISA) je imunološki test, ki zaznava različne tarče, kot so protitelesa, antigeni, proteini in glikoproteini. Je hitra in enostavna metoda za izvedbo. Zato se pogosteje uporablja v raziskovalne in diagnostične namene. ELISA vključuje uporabo encimov in specifično vezavo protitelesa in antigena. Glede na to, kako potekajo reakcije, obstajajo štiri vrste ELISA: neposredni ELISA, posredni ELISA, sendvič ELISA in inhibicijski ELISA. Neposredna, posredna in sendvič ELISA so vrste nekompetitivne ELISA, medtem ko je inhibicijska ELISA vrsta popolne ELISA. Glavni cilj tega članka je razpravljati o razliki med konkurenčnim in nekonkurenčnim testom ELISA.
Kaj je konkurenčna ELISA?
Kompetitivni ELISA meri koncentracijo antigena v vzorcu z detekcijo motenj signala. Tukaj analiza uporablja inhibitorni antigen. Gre torej za vrsto inhibicijskega testa ELISA. Med tem postopkom antigeni, prisotni v vzorcu, tekmujejo z izbranim referenčnim antigenom za vezavo na določeno količino označenega protitelesa. Poleg tega se ta postopek začne z inkubacijo vzorca s presežno količino označenega protitelesa. Poleg tega je treba referenčni antigen predhodno nanesti na ploščo za analizo z več jamicami. Nato je treba mešanico vzorcev dodati na preskusno ploščo, ki vsebuje referenčni antigen. Prosta protitelesa se bodo vezala na referenčni antigen, odvisno od količine antigena v vzorcu. Če je prisotnega več vzorčnega antigena, bo zaznanega manj referenčnega antigena. Tako ustvari šibkejši signal.
Slika 01: ELISA
Nasprotno, ko vzorec vsebuje manjšo količino antigena, bo vedno več referenčnega antigena zavzelo protitelesa in dalo močan signal. Ker kompetitivni test ELISA daje močnejši signal, ko vzorec vsebuje majhno količino antigenov, je kompetitivni test ELISA zelo občutljiv test, tudi za vzorce z majhnim številom antigenov.
V nekaterih konkurenčnih kompletih ELISA se namesto označenega protitelesa uporablja označeni antigen. Tukaj bosta označeni antigen in vzorčni antigen tekmovala za vezavo na primarno protitelo. Podobno, ko je količina antigena v vzorcu nizka, bo količina označenega antigena, ki se veže na protitelesa, večja in ustvari močnejši signal.
Kaj je nekonkurenčna ELISA?
Med štirimi vrstami ELISA so tri vrste nekonkurenčne ELISA. So neposredni ELISA, indirektni ELISA in sendvič ELISA. Vsi trije formati delujejo po skupnem principu ELISA z majhnimi razlikami v njihovih metodologijah.
Direct ELISA uporablja encimsko označeno primarno protitelo. Zato ne potrebuje sekundarnega protitelesa. Zato je direktna ELISA hitrejša od drugih vrst ELISA. Primarno protitelo se bo neposredno vezalo na imobilizirani ciljni antigen, ki je prisoten na ploščici. Tako bo potekala reakcija encim-substrat, ki bo proizvedla viden signal.
Slika 02: Sendvič ELISA
Za razliko od neposredne ELISA, indirektna ELISA uporablja neoznačeno primarno protitelo in encimsko označeno sekundarno protitelo. Ko se primarno protitelo veže na imobiliziran antigen, se sekundarno protitelo veže na primarno protitelo. Encim v sekundarnem protitelesu bo reagiral z antigenom in proizvedel viden signal. Sendvič test ELISA se razlikuje od neposrednega in posrednega testa ELISA. Tukaj je protitelo imobilizirano na steno testne plošče.
Kakšne so podobnosti med konkurenčno in nekonkurenčno ELISA?
- Kompetitivni in nekompetitivni ELISA sta dve vrsti tehnik imunosorbentnega testa.
- So zelo prilagodljive in občutljive tehnike.
- Poleg tega sta kompetitivni in nekompetitivni test ELISA encimsko vezani imunski test.
- Poleg tega obe metodi ustvarita signal zaradi reakcije encim-substrat.
Kakšna je razlika med konkurenčno in nekonkurenčno ELISA?
Kompetitivni ELISA je vrsta testa ELISA, ki se opira na dokončanje med analitnim antigenom in označenim antigenom za omejeno količino specifičnega protitelesa. Po drugi strani pa v nekompetitivni ELISA ne obstaja konkurenca med zanimivim antigenom in referenčnim antigenom. To je torej ključna razlika med konkurenčno in nekonkurenčno ELISA. Podobno je kompetitivni ELISA inhibicijski ELISA, medtem ko nekompetitivni ELISA ni inhibicijski ELISA. Torej, to je tudi razlika med konkurenčno in nekonkurenčno ELISA.
Poleg tega je konkurenčna ELISA primernejša za merjenje nizke količine zanimivega antigena. Je občutljiva metoda. Po drugi strani pa nekompetitivni test ELISA ni odvisen od števila antigenov, prisotnih v vzorcu. Zato je to tudi razlika med konkurenčno in nekompetitivno ELISA.
Spodnja infografika primerjalno pojasnjuje razliko med konkurenčnim in nekonkurenčnim testom ELISA.
Povzetek – konkurenčni proti nekonkurenčnemu ELISA
Kompetitivni in nekompetitivni ELISA sta dve glavni vrsti ELISA ali encimsko vezanih imunskih testov. Če povzamemo razliko med konkurenčno in nekompetitivno ELISA, se kompetitivna ELISA opira na konkurenco med antigenom, ki nas zanima, in referenčnim antigenom proti omejeni količini protiteles. Zato se konkurenčna ELISA imenuje tudi inhibicijska ELISA. Po drugi strani pa nekompetitivni ELISA ne temelji na konkurenci med ciljnimi in referenčnimi antigeni. Uporablja presežek označenega specifičnega protitelesa proti analitu, ki nas zanima. To je torej ključna razlika med konkurenčno in nekonkurenčno ELISA. Neposredna ELISA, posredna ELISA in sendvič ELISA so tri glavne vrste nekonkurenčne ELISA.
