Ključna razlika med progresivnim in regresivnim barvanjem je, da pri progresivnem barvanju tkivo pustimo v raztopini za barvanje le toliko časa, da dosežemo želeno končno točko, medtem ko pri regresivnem barvanju tkivo namerno pustimo za prekomerno barvanje, dokler ni barvilo nasiči vse elemente tkiva in jih nato odstrani.
Barvanje je tehnika, ki poudari in razlikuje komponente tkiva ter omogoča opazovanje pod mikroskopom. H in E barvanje je splošni postopek barvanja tkiv, ki se najpogosteje uporablja v histologiji. Uporablja hematoksilin in eozin (protibarvanje). Jedrsko barvanje s hematoksilinom je mogoče doseči s progresivnimi ali regresivnimi tehnikami barvanja. Nekatere formulacije hematoksilina se uporabljajo pri progresivnem barvanju. Mayerjev hematoksilin je en primer. Progresivni madeži imajo nizko koncentracijo hematoksilina. Zato počasi in selektivno obarvajo kromatin. Nekatere druge formulacije se uporabljajo pri regresivnem barvanju. Harrisov hematoksilin se uporablja pri regresivnem barvanju. Regresivni madeži imajo visoko koncentracijo hematoksilina; zato se madež hitro razprši po celi celici.
Kaj je progresivno obarvanje?
Progresivno barvanje je tehnika, ki omogoča, da tkivo v raztopini za barvanje le toliko časa, da doseže želeno končno točko. Zato je potrebno pogosto spremljanje kakovosti madežev, da se ugotovi, ali je barvanje dokončano. Intenzivnost obarvanja je nadzorovana s časom potopitve.
Slika 01: Struktura hematoksilina
Gillov hematoksilin in Mayerjev hematoksilin sta po naravi progresivna. Za ta dva hematoksilinga se pri progresivnem barvanju običajno uporablja čas obarvanja 5–10 minut. Na splošno so progresivni hematoksilini manj koncentrirani. Zato počasi in selektivno obarvajo kromatin. Pri progresivnem barvanju hematoksilin primarno obarva kromatin do želene intenzivnosti. Tako ni potrebna diferenciacija v razredčenem kislinskem alkoholu, da bi odstranili odvečni madež.
Kaj je regresivno obarvanje?
Regresivno barvanje je hitrejša tehnika barvanja, pri kateri je tkivo namerno preveč obarvano, dokler barva ne nasiči vseh komponent tkiva. Nato se tkivo selektivno razbarva, dokler ne doseže pravilne končne točke. Korak razbarvanja se imenuje diferenciacija. Diferenciacija se izvede za odstranitev odvečnih madežev. Običajno se to naredi z uporabo razredčenega kislinskega alkohola.
Slika 02: H in E barvanje
Harrisov hematoksilin je priljubljena vrsta hematoksilina. Ehrlichov in Delafieldov hematoksilin se uporabljata tudi pri regresivnem barvanju. Regresivni madeži imajo visoko koncentracijo hematoksilina. Zato hitro razpršijo celotno celico in obarvajo kromatin in citoplazmo. Regresivno barvanje je prednostno, kadar je potrebna zelo jasna diferenciacija tkivnih elementov.
Kakšne so podobnosti med progresivnim in regresivnim obarvanjem?
- Progresivno in regresivno obarvanje sta dve vrsti tehnik obarvanja.
- Oba uporabljata barvilo, imenovano hematoksilin.
Kakšna je razlika med progresivnim in regresivnim obarvanjem?
Progresivno obarvanje je počasnejši postopek obarvanja, pri katerem se tkivo pusti v raztopini za obarvanje le toliko časa, da doseže želeno končno točko. V nasprotju s tem je regresivno obarvanje hitrejši postopek obarvanja, pri katerem se tkivo namerno preveč obarva in nato odstrani. To je torej ključna razlika med progresivnim in regresivnim obarvanjem.
Poleg tega je še ena pomembna razlika med progresivnim in regresivnim barvanjem ta, da progresivno barvanje ne zahteva dodatnega koraka, imenovanega diferenciacija, medtem ko regresivno barvanje zahteva diferenciacijo, da se odstranijo odvečni madeži. Poleg tega imajo progresivna barvila nizko koncentracijo hematoksilinov, medtem ko imajo regresivna barvila višjo koncentracijo hematoksilinov.
Spodnja infografika prikazuje več razlik med progresivnim in regresivnim barvanjem.
Povzetek – Progresivno proti regresivnemu barvanju
Progresivno barvanje je tehnika počasnega barvanja, pri kateri se tkivo pusti v raztopini za barvanje le toliko časa, da doseže končno točko. Zato se čezmerno obarvanje ne izvaja, temveč progresivno obarvanje. V nasprotju s tem je regresivno barvanje hitrejša tehnika barvanja, pri kateri se tkivo preveč obarva in nato odstrani. Progresivno barvanje ne zahteva diferenciacije (odstranitve odvečnega madeža), medtem ko regresivno barvanje zahteva diferenciacijo v razredčenem kislinskem alkoholu, da se odstrani odvečen madež. Progresivni madeži imajo na splošno nizko koncentracijo hematoksilinov, medtem ko imajo regresivni madeži večjo koncentracijo hematoksilinov. To torej povzema razliko med progresivnim in regresivnim obarvanjem.
