Ključna razlika med BL21 in DH5 Alpha je, da je BL21 gensko spremenjena kompetentna celica E. coli s pomanjkanjem proteaze, ki se uporablja predvsem za izražanje beljakovin, medtem ko je DH5 Alpha gensko spremenjena kompetentna celica E. coli z mutacijo recA1, ki se uporablja predvsem za plazmidno transformacijo.
E. coli je eden od znanih organizmov izbire za rekombinantno proizvodnjo beljakovin. Z leti je postala najbolj priljubljena platforma za izražanje. Uporablja se tudi kot tovarna celic. BL21 in DH5 Alpha sta dve gensko spremenjeni celici E. coli, ki se trenutno uporabljata za izražanje beljakovin oziroma transformacijo plazmidov.
Kaj je BL21?
BL21 je gensko spremenjena kompetentna celica E.coli s pomanjkanjem proteaze, ki se uporablja predvsem za izražanje beljakovin. E. coli BL21 je bakterijska celica, pridobljena iz seva B. Ima okvare proteaze Lon in proteaze zunanje membrane ompT. Običajno se uporablja za ekspresijo rekombinantnih beljakovin, ker običajno zagotavlja stabilnost izraženih beljakovin. BL21 je uporaben za izražanje beljakovin z DNA pCold I-IV in DNA pCold TF. Toda ta kompetentna celica E. coli ni namenjena sistemu za izražanje beljakovin, ki uporablja promotor T7, kot je sistem pET. Razlog za to je, da BL21 ne izraža polimeraze T7 RNA. Poleg tega ga ni priporočljivo uporabljati za konstrukcijo ali pripravo plazmida, ker nima mutacije recA.
Slika 01: BL21
BL21 je prvi opisal Studier leta 1986 po različnih modifikacijah linije B. Celicam BL21 primanjkuje proteaze LON, ki razgrajuje številne tuje beljakovine. Poleg tega manjka še en gen, ki kodira proteazo zunanje membrane (OmpT), katere funkcija je razgradnja zunajceličnih beljakovin. Pomanjkanje teh proteinov sproži uspešno proizvodnjo tujega proteina v celicah E. coli BL21. Poleg tega mutacija hsdSB v teh celicah preprečuje metilacijo tuje DNA in motnje v celicah BL21.
Kaj je DH5 Alpha?
DH5 Alpha je gensko spremenjena kompetentna celica E. coli z mutacijo recA1, ki se uporablja predvsem za transformacijo plazmidov. Celice DH5 Alpha E. coli je gensko spremenil ameriški biolog Douglas Hanahan, da bi povečali učinkovitost transformacije. Celica DH5 Alpha ima tri različne mutacije: recA1, endA1 in lacZΔM15. recA1 je enotočkovna mutacija, ki nadomešča glicin 160 z ostankom asparaginske kisline v polipeptidu recA. Ta mutacija onemogoči aktivnost rekombinaz in inaktivira homologno rekombinacijo. endA1 mutacija inaktivira znotrajcelično endonukleazo, ki ji prepreči razgradnjo vstavljenega plazmida.
Slika 02: DH5 Alpha
Poleg tega mutacija lacZΔM15 omogoča modro-belo pregledovanje transformiranih celic. Te celice so kompetentne celice. Pogosto se uporabljajo s transformacijo kalcijevega klorida za vstavljanje želenega plazmida. Nedavne raziskave so pokazale, da je bila celica DH5 Alpha z metodo Hanahan najučinkovitejša kompetentna celica za transformacijo plazmidov.
Kakšne so podobnosti med BL21 in DH5 Alpha?
- BL21 in DH5 Alpha sta dve gensko spremenjeni E.coli
- Obe sta kompetentni celici.
- Sestavljeni so iz različnih mutacij.
- Oba nimata naravnega habitata.
- Uporabljajo se za laboratorijske namene, kot so študije izražanja in postopki kloniranja.
Kakšna je razlika med BL21 in DH5 Alpha?
BL21 je gensko spremenjena kompetentna celica E. coli s pomanjkanjem proteaze, ki se uporablja predvsem za izražanje beljakovin. Po drugi strani pa je DH5 Alpha gensko spremenjena kompetentna celica E. coli z mutacijo recA1, ki se uporablja predvsem za transformacijo plazmidov. Torej, to je ključna razlika med BL21 in DH5 Alpha. Poleg tega celica BL21 E. coli nima mutacije recA1, medtem ko ima celica DH5 Alpha E. coli mutacijo recA1.
Naslednja infografika navaja razlike med BL21 in DH5 Alpha v obliki tabele.
Povzetek – BL21 proti DH5 Alpha
Nepatogene seve E. coli so gensko razvili znanstveniki za laboratorijske ekspresijske študije in namene kloniranja. BL21 in DH5 Alpha sta dve gensko spremenjeni celici E. coli. BL21 se uporablja predvsem za študije izražanja beljakovin. Po drugi strani pa se DH5 Alpha uporablja predvsem za namene plazmidne transformacije. To je torej povzetek razlike med BL21 in DH5 Alpha.
