Ključna razlika – RPMI proti DMEM
Večina raziskovalnih študij vključuje gojenje živalskih celic, zato te študije zahtevajo vzdrževanje živalskih celičnih linij v posebnih pogojih rasti. Gojenje živalskih celic se pogosto izvaja v farmakoloških študijah za ugotavljanje presnove zdravil, pri diagnostiki bolezni in pri raziskavah raka. Gojišča celične kulture so pomemben vidik gojenja živalskih celic. Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) in Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) sta dva gojišča, ki se uporabljata pri gojenju živalskih celic. RPMI je medij, ki se pogosto uporablja za gojenje celic sesalcev v suspenzijski kulturi. DMEM je modificirana vrsta bazalnega medija s povečano koncentracijo aminokislin in vitaminov do štirikrat. DMEM se uporablja pri gojenju celic v adherentnih kulturah. Ključna razlika med obema medijema je vrsta kulture medija. RPMI se uporablja na suspenzijskih kulturah, medtem ko se DMEM uporablja za gojenje adherentnih celic.
Kaj je RPMI?
Medij RPMI ali Roswell Park Memorial Institute Medium se imenuje tudi RPMI 1640. Ime medija je izpeljano po inštitutu, v katerem je bil medij odkrit. Ta medij se običajno uporablja v kulturi živalskih celic, zlasti za rast celic sesalcev. Prvotno so bili razviti za gojenje človeških limfocitov.
Naslednje sestavine so vključene v RPMI.
- Glukoza
- indikator pH (fenol rdeče)\
- Soli (natrijev klorid, natrijev bikarbonat, dinatrijev fosfat, kalijev klorid, magnezijev sulfat in kalcijev nitrat)
- Aminokisline
- Vitamini (i-inozitol, holin klorid, para-aminobenzojska kislina, folna kislina, nikotinamid, piridoksin hidroklorid, tiamin hidroklorid, kalcijev pantotenat, biotin in riboflavin, cianokobalamin)
Posebnost RPMI je povečana koncentracija fosfata v mediju. RPMI se uporablja v atmosferi s 5 % ogljikovega dioksida. To bo zagotovilo maksimalne in optimalne pogoje za rast celic. pH medija se vzdržuje pri 8,0 s sistemom bikarbonatnega pufra.
Slika 01: Kultura celic na petrijevki
Uporaba RPMI v gojenju celic
- Gojitev človeških T in B limfocitov, celic kostnega mozga in hibridoma.
- Uporablja se za preučevanje človeških neoplastičnih celic.
Kaj je DMEM?
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) je modificiran medij, ki je komercialno pripravljen. Originalna tekstura srednjega prahu je rumena. V DMEM se koncentracija vitaminov poveča do štirikrat, s čimer se poveča vsebnost hranil v mediju.
DMEM je prav tako spremenjen z dodajanjem več soli, kot so železov nitrat, natrijev piruvat in nekatere neesencialne aminokisline, kot sta serin in glicin. Spremenjena je tudi formulacija glukoze v mediju. Prvotna formulacija je sestavljena iz 1000 mg/L glukoze, medtem ko je v DMEM koncentracija povečana na 4500 mg/L. DMEM zahteva tudi dodatek serumskega medija, saj ni popoln medij. Najpogosteje je DMEM dopolnjen s fetalnim govejim serumom (FBS). FBS zagotavlja potrebne beljakovine in rastne faktorje za proces gojenja.
PH medija se spreminja z dodatkom natrijevega bikarbonata. pH medija pred dodajanjem natrijevega bikarbonata je okoli 6,80 – 7,40, medtem ko je pH po dodajanju natrijevega bikarbonata v območju 7,60 – 8,20. Temperatura shranjevanja medija je 2 – 8 0C.
Slika 02: DMEM
Aplikacije DMEM
- Za preučevanje sposobnosti poliomavirusa za tvorbo plakov v mišjih embrionalnih celicah.
- V študijah inhibicije stika.
- V raziskavah in analizah piščančjih celičnih kultur.
Kakšne so podobnosti med RPMI in DMEM?
- Tako RPMI kot DMEM se uporabljata v kulturi živalskih celic.
- Mediji RPMI in DMEM so tekoče formulacije.
- Tako gojišča RPMI kot DMEM vsebujejo esencialne aminokisline, vitamine in anorganske soli, potrebne za rast.
- Mediji RPMI in DMEM so nepopolni. Zato je treba dodati serum.
- Tako medija RPMI kot DMEM uporabljata glukozo kot vir ogljika.
- Mediji RPMI in DMEM imajo višji pH.
Kakšna je razlika med RPMI in DMEM?
RPMI proti DMEM |
|
| RPMI je medij, ki se široko uporablja za gojenje celic sesalcev v suspenzijski kulturi. | DMEM je modificirana vrsta bazalnega medija s povečano koncentracijo aminokislin in vitaminov. |
| Prisotnost dodatnih fosfatov | |
| Prisoten v RPMI. | Odsoten v DMEM. |
| Uporabi | |
|
Uporablja se za gojenje celic v pritrjenih kulturah. Uporablja se za,
|
| Vrste kulture | |
| RPMI se uporablja za suspenzijske kulture. | DMEM se uporablja za kulture s prilepljenimi celicami. |
Povzetek – RPMI proti DMEM
Tako RPMI kot DMEM se pogosto uporabljata pri gojenju živalskih celic, zlasti za gojenje živalskih celičnih linij, vključno z limfociti in vitro. DMEM je modificiran bazalni medij, kjer je povečana koncentracija hranil. RPMI, ki ga je razvil Spominski inštitut Roswell Park, je tudi medij, ki se uporablja pri gojenju živalskih celic, zlasti za limfocite sesalcev. Oba medija sta komercialno dostopna. To je razlika med RPMI in DMEM.
