Ključna razlika – gel za zlaganje proti gelu za ločevanje
Izraza gel za zlaganje in ločevalni gel se uporabljata pri razlagi tehnike SDS-PAGE. SDS-PAGE ali elektroforeza z natrijevim dodecil sulfatom in poliakrilamidnim gelom je laboratorijska tehnika, ki se uporablja za ločevanje beljakovinskih molekul na podlagi njihove molekulske mase. Teorija za tehniko je, da proteini z različnimi molekulskimi masami kažejo različne stopnje migracije; molekule z nizko molekulsko maso migrirajo hitreje, medtem ko se molekule z visoko molekulsko maso selijo počasi. Medij za migracijo je gel. Obstajata dve vrsti gelov, imenovani gel za zlaganje in ločevalni gel. Ključna razlika med gelom za zlaganje in ločevalnim gelom je, da je pH gela za zlaganje 6,8, medtem ko je pH gela za ločevanje 8,8.
Kaj je Stacking Gel?
Stacking gel je nizko koncentriran poliakrilamidni gel, ki se nanese na vrh bolj koncentriranega ločevalnega gela (ločevalnega gela) v tehniki SDS-PAGE. Gel za zlaganje se uporablja za izboljšanje ločljivosti elektroforeze. Ločljivost se poveča zaradi razlike med koncentracijami gela za zlaganje in gela za ločevanje, ki vpliva na beljakovine v vzorcu. Ker je koncentracija poliakrilamida v gelu za zlaganje nizka, je velikost por večja. To tudi pomaga povečati ločitev.
Gel za zlaganje je ohlapen poliakrilamidni gel z velikimi porami iz približno 7 % poliakrilamida. Te pore ne delujejo kot pomembna ovira za velike beljakovinske molekule. Zato ta gel rahlo vpliva na mobilnost teh beljakovin. To omogoča ločevanje glede na mobilnost in velikost beljakovin tako, da jih koncentriramo med dvema geloma.
Slika 01: SDS-PAGE akrilamidni gel
Ph gela za zlaganje je 6,8. Njegov pH je kisel kot pH raztopine gela za 2 enoti pH. Ta pH pomeni nižjo ionsko moč in s tem višji električni upor. To izzove mobilnost beljakovin kot drugi nabiti delci, prisotni v gelu.
Kaj je ločilni gel?
Ločevalni gel ali ločevalni gel tehnike SDS-PAGE je visoko koncentriran poliakrilamidni gel, ki se namesti na vrh nizko koncentriranega gela za zlaganje. Ločevalni gel vsebuje visoko vsebnost poliakrilamida (10%). pH tega gela se ohranja na pH=8,8, kar je višja raven pH kot pri gelu za zlaganje.
Slika 02: Aparat za gelsko elektroforezo
Ko beljakovinske molekule dosežejo ločevalni gel, se migracija teh molekul upočasni, ker je ločevalni gel gel z visoko koncentracijo in majhnimi porami, ki lahko deluje kot precejšnja ovira za gibanje beljakovinskih molekul.. Ta upočasnitev omogoča, da drugi proteini počasi migrirajo, da jih dohitijo, kar ima za posledico ozek, koncentriran pas med dvema geloma.
Kakšno je razmerje med gelom za zlaganje in ločevalnim gelom?
Obe vrsti gela za zlaganje in ločevanja se uporabljata v isti napravi
Kakšna je razlika med gelom za zlaganje in ločevalnim gelom?
Gel za zlaganje proti gelu za ločevanje |
|
| Gel za zlaganje je nizko koncentriran poliakrilamidni gel, ki se nanese na vrh bolj koncentriranega ločevalnega gela (ločevalnega gela) v tehniki SDS-PAGE. | Ločevalni gel ali ločevalni gel tehnike SDS-PAGE je visoko koncentriran poliakrilamidni gel, ki se namesti na vrh nizko koncentriranega zlagalnega gela. |
| Umestitev | |
| Gel za zlaganje se položi na ločevalni (ločevalni) gel. | Ločilni gel se namesti na dno posode za gelsko elektroforezo. |
| Koncentracija | |
| Koncentracija gela za zlaganje je visoka. | Koncentracija ločilnega gela je nizka. |
| Vsebnost poliakrilamida | |
| Gel za zlaganje vsebuje približno 7 % poliakrilamida. | Ločevalni gel vsebuje približno 10 % poliakrilamida. |
| pH | |
| Ph gela za zlaganje je 6,8. | PH ločevalnega gela je 8,8. |
| Velikost por | |
| Gel za zlaganje ima velike pore. | V ločevalnem gelu so majhne pore. |
| Ločljivost | |
| Gel za zlaganje zagotavlja boljšo ločljivost. | Ločilni gel daje slabo ločljivost. |
Povzetek – gel za zlaganje proti gelu za ločevanje
Gel za zlaganje in ločevalni gel sta dve vrsti poliakrilamidnih gelov, ki se uporabljata za boljše ločevanje beljakovinskih molekul v danem vzorcu. Razlika med gelom za zlaganje in ločevalnim gelom je v tem, da je pH gela za zlaganje 6,8, medtem ko je pH gela za ločevanje 8,8.
