Ključna razlika – RNASE A proti RNASE H
Ribonukleaze so nukleaze, ki specifično razgradijo RNK na manjše enote. Razdelimo jih lahko v dve kategoriji; endoribonukleaze in eksoribonukleaze. Endoribonukleaza je endonukleaza, ki lahko razgradi enoverižno ali dvoverižno RNA. Cepi fosfodiesterske vezi znotraj polinukleotidne verige RNA. Primeri so RNaza A, RNaza III, RNaza T1, RNaza P in RNaza H. Eksoribonukleaza je eksonukleaza, ki razgradi RNK z odstranitvijo končnih nukleotidov s 5'-konca ali 3'-konca molekule RNK. Primeri so RNaza R, RNaza II, RNaza D in RNaza PH. Ključna razlika med RNASE A in RNASE H je, da je RNAse A pankreasna ribonukleaza, ki specifično razgradi enoverižno RNA na manjše komponente, medtem ko je RNAse H nespecifični encim, ki cepi RNA v hibridu RNA-DNA na manjše enote prek hidrolitični mehanizem.
Kaj je RNASE A?
RNAza A je pankreasna ribonukleaza, ki specifično cepi neparne ostanke citozina in uracila na 3' koncu enoverižne RNA. RNaza H deluje pri višji koncentraciji soli (0,3 M ali višja koncentracija NaCl). Hidrolitska reakcija poteka v dveh korakih. Tvori 3' fosforiliran produkt prek 2', 3' cikličnega monofosfatnega intermediata. Čeprav je specifičen za enoverižno RNA pri višji koncentraciji soli, lahko razgradi tudi dvoverižno RNA in RNA v hibridu RNA-DNA pri nižji koncentraciji NaCl (nižja od 0,3 M NaCl).
Bruce Merrifield je prvi sintetiziral ta encim. RNaza A je zelo priljubljen encim v molekularnih raziskavah. RNaza A goveje trebušne slinavke je primer RNaze A. In je eden najtežjih encimov, ki se uporabljajo v laboratoriju. Ta encim za svojo aktivnost ne potrebuje kofaktorja. Je zelo termostabilen encim. RNaza A je prvi encim in tretji protein, pri katerem je bilo zaznano pravilno zaporedje aminokislin. Ta encim je zelo majhen s 124 aminokislinami in molekulsko maso 12600da. Ima štiri histidinske ostanke (His 12 in His 119, ki sodelujeta pri katalitični reakciji).
Slika 01: RNaza A
RNazo A lahko izoliramo s prekuhavanjem surovega vzorca. Ko zavre, vsi drugi encimi razgradijo preostalo RNazo A. RNaza A je neverjetno stabilen encim. Ta encim zavira z zaviralci ribonukleaze beljakovine, komplekse težkih kovin in uridin vanadata.
Kaj je RNaza H?
RNAza H je nespecifični encim ribonukleaza, ki lahko s hidrolitično reakcijo razgradi RNA v hibridu RNA-DNA. RNaza H cepi 3'- O-P vez RNK v hibridu RNK-DNK. Končno proizvaja produkte s 3'OH in 5' fosfatnimi zaključki. Pri replikaciji DNA igra ključno vlogo z odstranitvijo primerja RNA po oblikovanju novih verig DNA. V laboratorijskih pogojih specifično razgradi RNA v hibridu RNA-DNA, ne pa tudi DNA in nehibridizirane RNA. In ta encim se običajno uporablja za uničenje predloge RNA, potem ko se med sintezo cDNA oblikuje prva komplementarna veriga DNA.
Slika 02: RNaza H
RNase H se uporablja tudi v testih zaščite pred nukleazo. Lahko se vključi tudi v odstranitev poli A repa iz mRNA. RNaza H ima sposobnost uničiti nekodirajočo RNK znotraj in zunaj celice. Kovinski ioni so potrebni kot kofaktorji za to proteinsko aktivnost. Za zaviranje encima RNaze H se lahko uporabi kelator (EDTA).
Kakšne so podobnosti med RNASE A in RNASE H?
- Oba sta po naravi beljakovina.
- Obe sta endoribonukleazi
- Oboje lahko razgradi RNA.
- Oba izvajata hidrolizne reakcije.
- Molekularni laboratoriji uporabljajo oboje.
Kakšna je razlika med RNASE A in RNASE H?
RNASE A proti RNASE H |
|
| RNaza A je pankreasna ribonukleaza, ki specifično cepi 3' konec neparnih ostankov citozina in uracila enoverižne RNA pri višji koncentraciji soli. | RNase H je nespecifični encim ribonukleaza, ki lahko s hidrolitično reakcijo razgradi RNA v hibridu RNA-DNA. |
| Narava cepitve RNA | |
| RNAza A specifično cepi enoverižno RNA pri višji koncentraciji soli. | RNAza H cepi RNA v hibridu RNA-DNA. |
| Potreba po kofaktorjih za aktivnost | |
| RNAza A za svojo aktivnost ne potrebuje kofaktorjev. | RNase H potrebuje kovinske ione kot kofaktorje za svojo aktivnost. |
| Zaviralci aktivnosti beljakovin | |
| Proteinski inhibitorji ribonukleaze, kompleksi težkih kovin in uridin vanadata zavirajo aktivnost RNAse A. | Kelator (EDTA) zavira aktivnost RNaze H. |
| Odstranitev primerja RNK pri replikaciji DNK | |
| RNaza A se ne uporablja za odstranitev primerja RNA pri replikaciji DNK. | RNase H se uporablja za odstranitev RNA primerja pri replikaciji DNA |
| Odstranitev šablone DNK pri sintezi komplementarne DNK (C-DNK) | |
| RNase A se ne uporablja za odstranitev matrice RNA med sintezo komplementarne DNA (C-DNA). | RNase H se uporablja za odstranitev matrice RNA med sintezo komplementarne DNA (C-DNA). |
| Odstranitev Poly-A-Tail v mRNA, hibridizirani v Oligo (dt) | |
| RNaza A se ne uporablja za odstranitev "repa poli-A" v mRNA, hibridizirani z oligo (dt). | RNaza H se uporablja za odstranitev "poli-A repa" v mRNA, hibridizirani z oligo (dt) |
Povzetek – RNASE A proti RNASE H
Ribonukleaze so encimi nukleaze, ki imajo sposobnost cepitve RNK na manjše enote. So dve vrsti; endoribonukleaze in eksoribonukleaze. Endoribonukleaza je endonukleaza, ki ima sposobnost razgradnje enoverižne ali dvoverižne RNA. In cepi fosfodiestrsko vez znotraj polinukleotidne verige RNA. RNaza A in RNaza H sta dve endoribonukleazi. RNaza A je pankreasna ribonukleaza, ki specifično cepi neparne ostanke citozina in uracila na 3' koncu enoverižne RNA pri višji koncentraciji soli. RNaza H je nespecifični encim ribonukleaza, ki lahko s hidrolitično reakcijo razgradi RNA v hibridu RNA-DNA. To je razlika med RNazo A in RNazo H.
Prenesite PDF RNASE A proti RNASE H
Lahko prenesete PDF različico tega članka in jo uporabite za namene brez povezave v skladu z opombo o citiranju. Prenesite PDF različico tukaj Razlika med RNASE A in RNASE H
